[发明专利]低毒单纯疱疹病毒系统及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组低毒单纯疱疹病毒，所述的低毒HSV通过将HSV-1 H129基因组中双拷贝的神经毒力因子γ34.5基因完全敲除，将完整的外源基因表达盒插入敲除的γ34.5基因座位中得到。

2.根据权利要求1所述的重组靶向载体，所述的完整的荧光基因表达盒包括：hUbC启动子、荧光基因和WPRE转录增强元件等。

3.一种制备携带红色荧光基因（SEQ ID NO.3）的低毒单纯疱疹病毒所用靶向载体pH129Δγ34.5-hUbC-tdTomato-WPRE-PA，序列为SEQ ID NO.1所示。

4.一种制备携带绿色荧光基因（SEQ ID NO.4）前无外源启动子的低毒单纯疱疹病毒所用靶向载体pH129Δγ34.5-EGFP-WPRE-PA，序列为SEQ ID NO.5所示。

5.利用权利要求3所述的靶向载体重组制备的低毒单纯疱疹病毒系统（命名为H129LT（low-toxic））。

6.利用权利要求3所述的靶向载体重组制备的低毒单纯疱疹病毒系统，其特征在于，所述外源基因表达盒包括一个启动子驱动外源基因表达，启动子可以是hUbC启动子、CMV启动子、CAG启动子、EF1α启动子、pTH启动子、pChAT启动子等。

7.利用权利要求3所述的靶向载体重组制备的低毒单纯疱疹病毒系统，其特征在于，所述外源基因表达盒表达一个由基因序列（SEQ ID NO.3）编码的红色荧光蛋白或由基因序列（SEQ ID NO.4）编码的绿色荧光蛋白，或其变体，或者其它任何目的外源基因;

因此可以用其它任何目的基因替代本发明用的荧光基因构建定制表达目的基因的低毒单纯疱疹病毒。

8.权利要求1所述的重组靶向载体或权利要求5所述的低毒单纯疱疹病毒系统的应用；所述的应用包括：神经环路标记示踪、大容量基因转导载体、神经系统靶向基因治疗、病毒复制与致病机理分析、动物感染模型建立、抗病毒药物筛选、溶瘤治疗等。

9.利用权利要求4所述的靶向载体重组制备的低毒单纯疱疹病毒及其应用，可用于分析γ34.5基因上游的启动子位置、组成、表达调控活性及在病毒复制过程中的作用等。