[发明专利]一种用于测定细胞毒素相关蛋白A抗体的免疫荧光试剂条及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种用于测定细胞毒素相关蛋白A抗体的免疫荧光试剂条及其制备方法和应用。本发明荧光该试剂条有三个区域，分别为：加样区、结合区、检测区。该试剂条由上而下分别为吸水垫、层析膜、结合垫、样品垫。其特征在于，结合垫上喷膜有标记了荧光物质CY3的CagA抗原，层析膜上C线包被有抗CagA的单克隆抗体，具有高特异性，可用于检测血清中CagA抗体。与荧光分析仪一起使用可以实现定量检测，操作简单方便。可用于实验室检测，也可用于现场快速检测，检测只需要约10min。

技术领域

本发明涉及一种用于测定细胞毒素相关蛋白A抗体的免疫荧光试剂条及其制备方法和应用，用于检测动脉粥样硬化的病人血清中的细胞毒素相关蛋白A抗体的浓度，属于免疫学检测领域。

技术背景

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多因素共同作用引起的，发病机制复杂，目前尚未完全阐明。AS是一种慢性炎症性疾病，炎性机制存在于AS病变的整个过程，炎症反应和免疫调节在AS发生发展的整个过程中有着重要作用。脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)、C-反应蛋白(CRP)等多种促炎物质，如溶血卵磷脂和氧化游离脂肪酸，产生多种致动脉粥样硬化作用，包括内皮细胞凋亡和内皮功能异常，刺激黏附因子和细胞因子的产生。

AS主要易感人群有高血压人群、高血脂人群和大量吸烟人群，另外还有糖尿病、肥胖和遗传因素等。动脉粥样硬化的症状主要取决于血管病变及受累器官的缺血程度。

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,HP)感染是最常见的胃肠道感染之一,中国HP感染率为34.52％～80.55％，平均感染率为58.07％。

研究表明60％～80％的HP具有单拷贝的细胞毒素相关蛋白基因 A，产生细胞毒素相关蛋白A(cytotoxin associated gene A protein, CagA)，CagA使得HP具有较强的致病作用。

越来越多的表明CagA阳性HP感染可能与胃肠外疾病有关。HP 感染与动脉粥样硬化形成有关，且只有CagA阳性菌株可能和动脉粥样硬化形成有关。对于HP感染致动脉粥样硬化相关性心脑血管疾病的机制，相关研究提出了一些可能，认为HP持续感染导致了炎症因子激活和释放,使脂质代谢紊乱促进动脉粥样斑块形成，CagA直接作用于血管壁引起血管平滑肌增生及局部炎症反应导致内皮损伤及功能紊乱。

鉴于此，建立一种有效、快速、简单、灵敏的检测细胞毒素相关蛋白A(CagA)抗体的方法具有重要意义。

发明内容

本发明研究制备了一种特异性高、灵敏度高的抗细胞毒素相关蛋白A的抗体，在此基础上制备了一种用于测定细胞毒素相关蛋白A 的免疫荧光试剂条。

本发明的目的是提供一种用于测定细胞毒素相关蛋白A抗体的免疫荧光试剂条及其制备方法和应用。用于检测动脉粥样硬化的病人血清中的细胞毒素相关蛋白A抗体的浓度。

为实现上述目的，本发明采用了荧光免疫层析原理制备了荧光免疫层析试纸条，该试剂条有三个区域，分别为：加样区、结合区、检测区。该试剂条的构建是将吸水垫、层析膜、结合垫、样品垫由上而下的顺序紧密粘合在底板上。荧光物质标记的抗原复合物(Cy3-CagA) 平铺于结合垫上，层析膜上划有检测线(T线)和质控线(C线)，T 线上包被有兔抗人IgG，C线上包被有抗CagA单抗CA-1。滴于样品垫上的待检样品液在毛细层析的作用下流动至结合垫上，待检样品中的人抗CagA抗体与结合垫上的荧光抗原(Cy3-CagA)发生免疫反应后形成复合物，随后一起迁移到NC膜上，到达T线时与T线包被的兔抗人IgG结合并富集截留于T线处，剩余的未反应的荧光抗原与C线包被的抗CagA单抗CA-1结合并富集截留于C线处，在免疫荧光分析仪中检测获得检测结果。兔抗人IgG为购买的商业化抗体。 T线检测病人CagA抗体浓度；C线处，过量的Cy3-CagA抗原复合物与鼠单抗(即抗CagA单抗CA-1)特异结合；CagA抗原的表达和生产通过大肠杆菌完成。