[发明专利]大肠杆菌中具有产氢功能基因的载体pET32a-fdhF-1及其构建和应用在审
| 申请号： | 201810093583.5 | 申请日： | 2018-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN108220319A | 公开（公告）日： | 2018-06-29 |
| 发明（设计）人： | 王海燕;刘伟;赵雅琪;徐岚婷;王冕超 | 申请（专利权）人： | 北京工业大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C12N15/53;C12P3/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京思海天达知识产权代理有限公司 11203 | 代理人： | 刘萍 |
| 地址： | 100124 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 产氢 构建 甲酸脱氢酶 功能基因 基因工程技术 产氢培养基 产氢效率 基因测序 基因片段 基因载体 设计引物 验证基因 质粒转化 扩增 酶切 应用 转入 基因 | ||
【权利要求书】：
1.产氢功能基因载体pET32a-fdhF-1，其特征在于，所述基因载体为包含有大肠杆菌甲酸脱氢酶基因fdhF的pET32a质粒。
2.根据权利要求1所述的产氢功能基因载体pET32a-fdhF-1，其特征在于所述大肠杆菌Escherichia coli BL21的DE3菌株。
3.构建如权利要求1或2所述的产氢功能基因载体pET32a-fdhF-1的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)设计大肠杆菌甲酸脱氢酶基因fdhF的引物，并PCR扩增大肠杆菌甲酸脱氢酶基因fdhF；
(2)回收甲酸脱氢酶基因fdhF的基因片段，进行测序验证扩增基因的完整性；
(3)使用限制性内切酶NdeⅠ和XhoⅠ双酶切pET32a载体，切胶回收，获得线性化载体；从连接了fdhF基因片段的克隆载体上，酶切并回收fdhF片段；
(4)通过T4DNA连接酶将准备好的线性化pET32a载体和fdhF片段连接起来，得到含基因fdhF的重组载体；
(5)将重组载体转化DH5α感受态细菌，获得正确构建的pET32a-fdhF-1载体。
4.大肠杆菌中具有产氢功能基因的载体pET32a-fdhF-1的应用，其特征在于，将权利要求1或2所述产氢功能基因载体pET32a-fdhF-1转化到大肠杆菌中，在产氢培养基中培养此大肠杆菌产氢。
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