[发明专利]血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法

说明书

血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法，包括：收集NSCLC患者、肺良性病变患者和正常人的血清样本；对血清样本预处理，并采用超高效液相‑四级杆‑飞行时间质谱的方法检测各血清样本中脂质代谢标志物；通过多元变量模式识别分析的方法进行NSCLC相关差异脂质代谢标志物的筛选；通过NSCLC差异脂质代谢物的KEGG分析和代谢通路分析，筛选出与脂质代谢物相关性最高的关键代谢通路；进行NSCLC差异脂质代谢物的“基因‑酶‑反应‑代谢物”网络分析，获得NSCLC差异脂质代谢物网络图；综合NSCLC差异脂质代谢标志物筛选及代谢通路分析结果，筛选获得NSCLC血清早期诊断脂质生物标志物。

技术领域

本发明涉及血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法。

背景技术

肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌(NSCLC)包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。传统的影像学和痰液脱落细胞学仍是目前筛查早期肺癌的主要手段，但存在一定漏诊和误诊，病理学检查虽然能够诊断肺癌，但会对人体造成很大创伤。因此，早期筛查已成为肺癌防治的关键，探索和建立一种简单、快速、敏感性高和特异性强的早期诊断技术等已是临床医学上的迫切需要。

脂质组学是对整体脂质进行系统分析的一门新兴学科，通过比较不同生理状态下脂代谢网络的变化，进而识别代谢调控中关键的脂生物标志物，最终揭示脂质在各种生命活动中的作用机制。

脂代谢物谱的分析要求高灵敏度、高通量和无偏向性的分析方法。由于脂代谢物和生物体系的复杂性，至今为止，尚无一种能满足上述所有要求的代谢组学分析技术。现有的核磁共振技术(NMR)具备快速和无偏向性的特点，但其灵敏度太低。色谱/质谱联用技术将色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂混合物更准确的定性定量分析，也简化了样品的前处理过程。气相色谱/质谱联用(GC-MS)灵敏度较高，但其研究范围仅限于分析挥发性的物质，无法分析热不稳定性和分子量较大的代谢产物。这一缺陷正好可由液相色谱/质谱联用(LC-MS)技术来弥补。因此，LC-MS使得快速发现、灵敏检测和证实新的和不寻常的脂族化合物和脂肪酸(包括生物膜主要组分、脂类信号分子)的效率明显提高。超高效液相色谱(UPLC)耦合四级杆串联飞行时间质谱(Q-TOF)，两者的联用适合于复杂体系的分离分析和未知物的结构鉴定。

发明内容

本发明提出了一种血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法，该方法具有简单、快速、敏感性高和特异性强的优点。

本发明采用的技术方案是：

血清脂质生物标志物在NSCLC早期诊断中的应用方法，包括：

(1)收集NSCLC患者、肺良性病变患者和正常人的血清样本；

(2)对血清样本预处理，并采用超高效液相-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)的方法检测各血清样本中脂质代谢标志物，获得脂质代谢指纹图谱；

(3)通过多元变量模式识别分析的方法进行NSCLC相关差异脂质代谢标志物的筛选；

(4)通过NSCLC差异脂质代谢物的KEGG(京都基因与基因组百科全书，KyotoEncyclopedia of Genes and Genomes)分析和代谢通路分析，筛选出与脂质代谢物相关性最高的关键代谢通路；

(5)进行NSCLC差异脂质代谢物的“基因-酶-反应-代谢物”网络分析，获得NSCLC差异脂质代谢物网络图；

(6)综合NSCLC差异脂质代谢标志物筛选及代谢通路分析结果，筛选获得NSCLC血清早期诊断脂质生物标志物；