[发明专利]苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法

说明书

本发明提供一种苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法，用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物，再经过大孔树脂柱层析分离，半制备HPLC纯化，分别得到式(I)和式(II)所示的葫芦素E及单葡萄糖苷。本发明首次公开了从苦西瓜中提取纯化获得葫芦素E及其糖苷的方法，所得终产物的产率和纯度高，流程简单，易于工业化放大生产。

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，具体地说，涉及一种从苦西瓜中制备葫芦素E及糖苷的方法。

背景技术

苦西瓜是指葫芦科西瓜属带有苦味的西瓜品种，如药西瓜(拉丁名Citrulluscolocynthis)、未经驯化的西瓜(拉丁名Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum.et Nakai，英文名Water Melon)野生品种及人工培育的带苦味的西瓜等。其中，药西瓜又称“苦西瓜”、“苦苹果”或“苦黄瓜”，原产于地中海地区，在我国主要分布在新疆等地，是维吾尔族习用药材，收载于我国一九九八年卫生部颁药材标准(维吾尔分册)中。主要适用于由寒气所引起的各种疾病，缓解疼痛，通气，消肿止痛。主治便秘，瘫痪，开窍，牙疼，胸闷，风湿等。

苦西瓜果实和根中含有多种葫芦素成分，其中以葫芦素E及其单葡萄糖苷含量最高。现代药理研究表明，葫芦素类化合物具有很强的抗癌活性。据报道，葫芦素B、E、I，对乳腺癌、肺癌、肝癌等癌细胞的增殖具有很强的抑制作用。甜瓜中的葫芦素B、E已被开发成五类中药“葫芦素片”，主要应用于湿热毒盛所致迁延性肝炎、慢性肝炎及原发性肝癌的辅助治疗。

葫芦素E(Cucurbitacin E)，异名α-西洋苦瓜素。分子式C₃₂H₄₄O₈，分子量：556.695，CAS号：18444-66-1。葫芦素E最早分别于1909年和1910在喷瓜和药西瓜中被发现，此后，在甜瓜、西瓜、雪胆、栝楼、天花粉等葫芦科植物中发现有葫芦素E的存在，其中，以甜瓜蒂中的含量最高，但仍不足0.4％(干重)。目前市售的葫芦素E均从甜瓜蒂中提取纯化而来，但甜瓜蒂中主要为葫芦素B，而葫芦素E含量相对极低，且二者极性大小接近，这给葫芦素E的提纯带来很大的干扰，使得工艺流程复杂，成本难以得到有效的降低，售价高达四万元每克。

前期研究发现，药西瓜和西瓜野生品种中葫芦素E及其单葡萄糖苷的含量很高，其中，药西瓜中葫芦素E及其单葡萄糖苷合计达到6％(湿重)(图1)，但目前尚未有苦西瓜中葫芦素E及其糖苷制备工艺的文献报道，本发明采用葫芦素E及其糖苷含量极高的苦西瓜为提取原材料，可极大地降低葫芦素E及其糖苷的生产成本。

发明内容

本发明的目的是提供一种从苦西瓜中提取葫芦素E及其糖苷的方法。

为了实现本发明目的，本发明提供的苦西瓜中葫芦素E及糖苷的制备方法，用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物，再经过大孔树脂柱层析分离，半制备HPLC纯化，分别得到式(I)和式(II)所示的葫芦素E及单葡萄糖苷。

本发明中醇提对象为苦西瓜鲜药材，或干药材粗粉。具体地，鲜药材用匀浆机打碎后，用乙醇提取；或者，将成熟的苦西瓜晒干、粉碎，过24目筛，得到干药材粗粉，然后用乙醇提取。

前述的方法，包括以下步骤：

1)用乙醇提取苦西瓜，然后除去乙醇，收集醇提物；

2)将所述醇提物溶解于乙醇中，使乙醇含量达20％，离心或抽滤收集上清液或滤液；

3)所述上清液或滤液进行大孔树脂柱层析分离，依次用水、30％乙醇、浓度不低于35％的乙醇、浓度不低于60％的乙醇梯度洗脱，分别收集浓度不低于35％和不低于60％的乙醇洗脱组分；

4)将收集得到的浓度不低于35％的乙醇洗脱组分用半制备HPLC进行分离纯化，得到式(II)所示化合物；