[发明专利]水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记及其应用在审
| 申请号： | 201810084388.6 | 申请日： | 2018-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN107988423A | 公开（公告）日： | 2018-05-04 |
| 发明（设计）人： | 袁彩勇;李刚;谢青轩;杨丹;刘宏宇;王健;程保山;罗伯祥;储成才 | 申请（专利权）人： | 江苏徐淮地区淮阴农业科学研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京国坤专利代理事务所(普通合伙)11491 | 代理人： | 赵红霞 |
| 地址： | 223001 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 水稻 转基因 除草剂 基因 osals snp 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记，其特征在于，所述水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记检测水稻第2号染色体第18237999bp处SNP变异，多态性为G/A。
2.一种如权利要求1所述水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记使用的引物，其特征在于，所述引物的序列为：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3。
3.一种如权利要求1所述的水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记或权利要求2所述引物在水稻育种中的应用。
4.一种如权利要求1所述的水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记或权利要求2所述引物在鉴定抗咪唑啉酮类除草剂水稻品种中的应用。
5.一种如权利要求1所述的水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记或权利要求2所述引物在鉴定抗咪唑啉酮类除草剂水稻基因型中的应用。
6.一种包含权利要求2所述引物的辅助鉴定水稻抗除草剂基因OsALS的试剂盒。
7.一种如权利要求6所述试剂盒在水稻种质资源改良中的应用。
8.一种如权利要求6所述试剂盒在水稻育种中的应用。
9.一种如权利要求6所述试剂盒在检测抗咪唑啉酮类除草剂水稻品种或鉴定抗咪唑啉酮类除草剂水稻基因型中的应用。
10.一种如权利要求1所述的水稻非转基因抗除草剂基因OsALS的SNP分子标记或权利要求2所述引物的检测抗咪唑啉酮类除草剂水稻的方法，其特征在于，所述检测抗咪唑啉酮类除草剂水稻的方法包括以下步骤:
(1)提取待测水稻基因组DNA，以其为模板，利用本发明的上述引物组合进行KASP反应检测；PCR扩增反应使用的扩增体系以5μl计为：2.5μl模板DNA，后加入2×KASP Master Mix 2.5μl、Assay mix 0.07μl；PCR扩增反应的条件为：PCR扩增在水浴热循环仪中完成，Touchdown PCR反应条件为:94℃预变性15分钟；第一步扩增反应，94℃变性20秒，61℃-55℃退火并延伸60秒，10个循环，每个循环退火及延伸的温度降低0.6℃；第二步扩增反应，94℃变性20秒，55℃退火并延伸60秒，26个循环；反应完成后利用扫描仪Pherastar对KASP反应产物进行荧光数据读取，荧光扫描的结果会自动转化成图形；
(2)检测扩增产物片段的第23bp处的碱基种类，若碱基种类为A，则待测水稻为抗除草剂水稻，若碱基种类为G，则判定待测水稻不是抗除草剂水稻。
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