[发明专利]一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒及其方法

权利要求书

1.一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，采用多重环介导等温扩增结合胶体金免疫层析法同时检测食品中副溶血性弧菌、沙门氏菌和单增李斯特菌三种食源性致病菌，其包括引物、LAMP扩增反应体系和胶体金免疫层析三重检测试纸；

(1)引物：包括含FIP、BIP、F3、B3、LoopF和LoopB，其中BIP引物标记上FITC抗体，LoopB引物标记上荧光探针；

引物序列如下：

tlh-FIP：CTGTCACCGAGTGCAACCACTT-AACCACACGATCTGGAGCA；

tlh-BIP-FITC：GCATCACAATGGCGCTTCCC-ACCGTTGGAGAAAGTGACCTA，5’

端标记荧光素；

tlh-F3：CGCTGACAATCGCTTCTCAT；

tlh-B3：GTTCTTCGCTTTGGCAATGT；

tlh-LF：CTGCATTGCTGCGTCGT；

tlh-LB-Bio：TAACCCGAACAGCTGGTTCT，5’端标记生物素；

invA-FIP：GCATCCGCATCAATAATACCG-CTCTGGATGGTATGCCCGG；

invA-BIP-FITC：GAACGGCGAAGCGTACTGGAA-CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’

端标记荧光素；

invA-F3：GTTGTCTTCTCTATTGTCACCGTGGT；

invA-B3：CCGCCAATAAAGTTCACAAAGAT；

invA-LF：TCTGGATGGTATGCCCGGT；

invA-LB-TEX：CATCGCACCGTCAAAGGAA，5’端标记德克萨斯红；

iap-FIP：AGGTTTTGCTTGAGATTCAGAGAT-TAATCTCCCTTCCACGTACT；

iap-BIP-FITC：TTGACTATGGTAGCGGAATTTCTC-TTAACGCCATTGTCTTGC，5’

端标记荧光素；

iap-F3：CTGGTTACACTAAATATGTATTTGC；

iap-B3：GCCGTGGATGTTATCGTAT；

iap-LF：GTAGTGCTAGCGTATTGTGCG；

iap-LB-DIG：GGTATCTACGTTGGTAATGGTCAA，5’端标记地高辛精；

(2)LAMP扩增反应体系：每25μl反应液含2.5μl 10×的缓冲液，3.5μl dNTP混合液(每一种10mM)，3.9μl引物混合物，其中每组引物各加1.3μl，1μl Bst聚合酶，1μl DNA样品，无菌去离子补余；

(3)胶体金免疫层析三重检测试纸：试纸由缓冲液垫、胶体金结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成。

2.根据权利要求1所述的一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，所述试纸的尺寸为5mm×77mm，硝酸纤维素膜的长度为25mm。

3.根据权利要求1所述的一种可视快速检测食源性致病菌的试剂盒，其特征在于，所述胶体金结合垫上标记链霉亲和素，硝酸纤维素膜上分别点上链霉亲和素、小鼠抗DIG单克隆抗体和德克萨斯红抗体作为检测线T1、T2和T3，点上羊抗鼠抗体作为质控线C。