[发明专利]检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的底物及其制备方法和试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测N‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷酶的底物，具体为百里酚酞‑2‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，其制备方法包括如下步骤：将百里酚酞与2‑乙酰氨基‑3,4,6‑三‑O‑乙酰‑2‑脱氧‑A‑D‑吡喃葡萄糖酰基氯反应制得百里酚酞‑N‑乙酰基‑3,4,6‑O‑三乙酰基‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，然后脱除乙酰基得到百里酚酞‑2‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷。本发明百里酚酞‑2‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷作为检测N‑乙酰氨基‑2‑脱氧‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷酶的底物，具有显色灵敏不易漏检的优点，并且合成过程简单，降低成本。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种用于检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的底物及其制备方法，以及用于检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的试剂盒。

背景技术

N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶是一种位于溶酶体内的酸性水解酶，分子量约为140000，存在于所有组织中，以前列腺和肾小管含量最高。当自身组织受损时，特别是近曲肾小管受到伤害时，尿中N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的活性显著增高，且较其它尿酶的增高更早出现，因此可以通过体外检测尿液中的N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶对肾小管损害的早期诊断、病情监测提供依据。

然而现在大部分采用4-硝基苯基-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷为底物，检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶，此底物主要存在以下问题：1、显色不灵敏，容易把弱阳性漏检；2、显色是黄色，容易和尿液的颜色混淆不易辨别。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的底物及其制备方法和试剂盒，以解决背景技术存在的上述缺陷。

本发明是通过如下的技术方案实现的：

一种检测N-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷酶的底物，具体为百里酚酞-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷，其化学结构式如下：

该化合物物性参数如下：

¹HNMR(DMSO-d₆,400MHz):δ1.35(m,12H),1.83(s,3H),2.37(s,6H),3.22(m,1H),3.29(m,1H),3.32(m,1H),3.35(m,1H),3.76(m,2H),4.66(m,1H),4.74(m,1H),5.03(1H,m),5.11(m,1H),6.38(s,2H),6.85(m,2H),7.45(m,4H),7.91(s,2H)。

分子量：633。

本发明还公开了上述百里酚酞-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法，包括如下步骤：将百里酚酞与2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脱氧-A-D-吡喃葡萄糖酰基氯反应制得百里酚酞-N-乙酰基-3,4,6-O-三乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷，然后脱除乙酰基得到百里酚酞-2-乙酰氨基-2-脱氧-β-D-吡喃葡萄糖苷。

优选的，所述百里酚酞-N-乙酰基-3,4,6-O-三乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷是通过如下方法制备的：将百里酚酞、四丁基硫酸氢铵(TBAHS)和2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脱氧-A-D-吡喃葡萄糖酰基氯溶于二氯甲烷中,然后加入碳酸钾水溶液充分反应，分离有机相经浓缩提纯后得到所述百里酚酞-N-乙酰基-3,4,6-O-三乙酰基-β-D-吡喃葡萄糖苷。

其中，百里酚酞、四丁基硫酸氢铵和2-乙酰氨基-3,4,6-三-O-乙酰-2-脱氧-A-D-吡喃葡萄糖酰基氯的摩尔比为1：1：1。