[发明专利]一种酶法制备阿利吉仑关键中间体的方法

说明书

本发明公开了一种酶法制备阿利吉仑关键中间体的方法，以3‑硝基丙酸为原料经酯化、甲基化、氨解、硝基还原反应得到2,2‑二甲基‑3‑氨基丙酰胺。其中还原反应在硝基还原酶、辅酶和缓冲液的作用下酶法制备得到2,2‑二甲基‑3‑氨基丙酰胺。与现有技术相比，本发明提供的方法环境友好、有机三废排放量小、原料易得、收率较高、生产成本大大降低，具有良好的工业应用价值。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种酶法制备阿利吉仑关键中间体的方法。

背景技术

阿利吉仑是近年来合成的第一个口服、非肽类、直接肾素抑制剂。相对分子质量为609.8(游离碱为551.8)，理化性质稳定，水溶性高。2007年3月抗高血压药阿利吉仑(商品名:Tekturna)被美国食品药品监督管理局(FDA)批准上市，2008年1月，由阿利吉仑和双氢噻嗪组成的复方制剂也获得了FDA的上市许可。

阿利吉仑能在第一环节阻断RAS系统，降低肾素活性，减少AngII和醛甾酮的生成，不影响缓激肽和前列腺素的代谢，起到降血压和治疗心血管疾病的作用。从目前研究来看，阿利吉仑是强效的、高效选择性的、口服有效且长效的新一代抗高血压药物。由于阿利吉仑有着很好的治疗高血压的临床效果，自上市以来迅速成为重磅原料药，受到各大制药公司的关注。

阿利吉仑制剂剂量较大，因此原料成本的控制显得至关重要。而2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺是合成阿利吉仑的关键中间体，因此开发一种环保、成本较低的2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺的制备工艺具有非常重要的现实意义。

目前2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺公开的制备方法均为化学法，制备过程中会涉及到易爆物的使用、高温高压条件、有机三废的大量排放，生产安全隐患较高、对生产设备及人员的要求较高、环境污染严重，生产成本较高，经济可持续发展性不强，不适合工业化大生产。

Buckley等人报道了以1-硝基异丁烯为原料与氰化钾反应，后用兰尼镍还原得到2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺。该路线中原料在市场中无大量供货厂家，且合成难度较大，另外需要剧毒品氰化钾，还原反应采用昂贵的试剂和易爆物氢气，故此路线难以工业化生产。

EP1548024报道了以氨基特戊醇为原料，经氯甲酸苄酯保护、氯化钌和高碘酸钠氧化、氨解、氢化、脱保护反应得到2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺。该路线合成步骤较长、用到昂贵的催化剂、需要高压条件、有机三废排放量大，不适合工业化生产。

发明内容

为了克服现有技术存在的缺陷，本发明公开了一种酶法制备阿利吉仑关键中间体的方法。

具体路线如下所示，

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

2,2-二甲基-3-硝基丙酰胺在硝基还原酶的作用下进行还原反应得到2,2-二甲基-3-氨基丙酰胺。

进一步说，还原反应还包括辅酶、缓冲液。其中辅酶可选自NAD、NADP、NADH、NADPH的一种或几种，优选NADPH；缓冲液选自磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液，优选磷酸盐缓冲液。

进一步说，还原反应在pH＝6～9,温度为30～70℃下进行。

进一步说，还原反应中2,2-二甲基-3-硝基丙酰胺的浓度为50～200g/L，硝基还原酶的浓度为0.01～1g/L，辅酶浓度为0.005～0.01g/L，缓冲液浓度为30～100mM/L。

进一步说，所述硝基还原酶以酶粉、含有硝基还原酶的细胞破碎液、或含有硝基还原酶的菌体形式加入，优选以酶粉形式加入。

进一步说，所述硝基还原酶可从市场上商购得到。

进一步说，2,2-二甲基-3-硝基丙酰胺的制备方法如下所示：