[发明专利]一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法

说明书

本发明公开了一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法，包括如下步骤：将芽孢杆菌菌种进行一级、二级种子扩大培养；将扩大培养后的菌种接入具有发酵罐有效容积50‑70％的基础培养基中进行发酵培养；在发酵培养过程中发酵过程中进行两次流加补料。本发明的方法通过补料流加碳源和基础培养基中相对缺乏的限制性氨基酸，发酵培养后尤其是对于枯草芽孢杆菌，经喷雾干燥得到的菌粉每克CFU不少于2.0×10¹¹个枯草芽孢杆菌，显著提高单位产量，降低了单位成本。将利用上述发酵方法培养过的枯草芽孢杆菌ANSB060用于降解黄曲霉毒素，反应48小时后，体系中黄曲霉毒素B1可以被完全清除。

技术领域

本发明涉及微生物发酵技术领域，具体涉及一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法。

背景技术

随着消费者对食品卫生和安全性的普遍关注以及研究者对霉菌毒素研究的不断深入，原料和饲料中的霉菌毒素污染情况也日益引起动物营养界和饲料界的重视。目前已知的霉菌毒素有300多种，其中黄曲霉毒素(AF)是一类主要由曲霉属的真菌，如黄曲霉(Aspergillus flavus)、寄生曲霉(A.parasiticus)产生的有毒次级代谢产物，具有强的毒性、致癌性和诱变性，严重威胁动物生产和人类的健康。

自从1960年黄曲霉毒素被发现以来，科学工作者便不断地研究该类毒素的防控和脱毒方法。目前对黄曲霉毒素解毒方法的研究大部分集中在化学脱毒法和物理脱毒法。传统的理化方法去毒都存在一些问题，如导致饲料中的营养损失，影响饲料的感官品质，有些方法所需要的设备价格昂贵等等，从而限制了实际生产中的应用。利用微生物脱毒的方法有很多报道，多集中在野生菌的筛选上，例如，枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis ANSB060(简称枯草芽孢杆菌ANSB060)，是本发明人实验室筛选得到的一株可以高效降解黄曲霉毒素的枯草芽孢杆菌，已于2009年11月12日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.3440，在中国专利文献CN 101705203A中公开。为具有降解霉菌毒素的菌种寻找适合的发酵方法，在发酵过程中尽快提高菌种的活菌数、转化芽孢率和降解霉菌毒素的活性，具有非常重要的意义，可以极大地降低工业化发酵生产中的成本，增加效率。

发明内容

本发明的要解决的技术问题是为了克服现有技术中存在的问题，提供一种一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法，此方法可以提高芽孢杆菌发酵活菌数、转化芽孢率及其对霉菌毒素的降解效率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种芽孢杆菌流加补料的发酵方法，包括如下步骤：

(1)将芽孢杆菌菌种进行一级、二级种子扩大培养；

(2)将扩大培养后的菌种接入具有发酵罐有效容积50-70％的基础培养基中进行发酵培养；在发酵培养过程中进行两次流加补料：

当发酵至8-10h进行第一次流加补料，补加培养基A，补加量为基础培养基体积的0.1-1.0‰；所述培养基A包括质量百分比为5-15％的碳源；

当发酵至12-16h进行第二次流加补料，补加培养基B，补加量为基础培养基体积的0.1-1.0‰；所述培养基B包括质量百分比为5-10％的碳源和2.54-7％的基础培养基中缺乏的菌种限制性氨基酸。

上述发酵方法中，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，优选的，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌ANSB060。

上述发酵方法中，所述发酵培养的方法为：将含有二级菌种的二级种子培养基按体积比1:20-100接种于基础培养基中，控制罐压为0.02Mpa-0.05Mpa，在30-35℃下培养24-36h。