[发明专利]一种假单胞菌酸A的制备方法

权利要求书

1.一种假单胞菌酸A的制备方法，其特征在于，依次包括以下步骤：

(1)荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)菌种在液体发酵培养基中深层发酵至菌体浓度达5g/L；

(2)按1.0-3.0g/L浓度补加亚油酸和亮氨酸的混合物，然后流加氨水和柠檬酸钠的混合物，控制pH在5.6-5.8；

(3)继续深层发酵至所需假单胞菌酸A浓度后终止发酵。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述荧光假单胞菌为保藏号为CGMCCNo.7147的荧光假单胞菌株；和/或，步骤(3)中所需假单胞菌酸A浓度不低于2850mg/L；较佳地，不低于2900mg/L；更佳地，不低于3000mg/L。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，其使用的液体发酵培养基为LB培养基。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的液体发酵培养基的组成为：甘油50g/L、黄豆饼粉10g/L、蛋白胨10g/L、(NH₄)₂SO₄ 5g/L、K₂HPO₄ 1.0g/L、MgSO₄ 3g/L、余量为水，pH7.0-7.2。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的深层发酵在温度为26-32℃、通气量1:0.5-1:1.5vvm、搅拌速度180-220rpm的发酵罐中进行；较佳地，发酵温度为30℃，所述通气量1:1vvm，和/或所述搅拌速度200rpm。

6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤(1)之前还包括以下步骤：

(01)将所述菌种接种到种子培养基中，所述种子培养基组成为：葡萄糖10g/L，蛋白胨10g/L，酵母膏5g/L，NaCl 1g/L，余量为水，pH7.0-7.2；然后在温度为26-32℃、转速为180-220rpm的摇瓶中发酵16-32小时，获得种子液；优选地，在发酵温度为30℃、转速为200rpm的回转式摇瓶柜中发酵24小时；

(02)将步骤(01)中获得的种子液制备成0.5-1.5g/L的菌液，按体积比1-1.5％的比例接种到所述发酵培养基中；优选地，种子液制备成1.0g/L的菌液，按体积比1％的比例接种。

7.如权利要求1～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述补加的亚油酸和亮氨酸混合物其质量比为1:3-3:1；优选1:2-2:1。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述补加的亚油酸和亮氨酸混合物其质量比为1:1。

9.如权利要求1～8任一项所述的制备方法，其特征在于，控制pH的氨水和柠檬酸钠混合物的质量比为3:1-1:1。

10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述控制pH的氨水和柠檬酸钠混合物的质量比为2:1。