[发明专利]一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法

权利要求书

1.一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将罗伊氏乳杆菌从平板接种到种子培养基中，37℃厌氧培养12-18h，每升种子培养基配方包括以下原料：20g蔗糖、20g酵母浸膏、3.0g磷酸氢二钾，7.0g乙酸钠、1.0g柠檬酸铵、0.2g硫酸镁、0.18g硫酸锰、1.0g吐温80和余量的蒸馏水，配置时用磷酸调pH至6.2后得到种子培养基；

(2)将种子按3％-10％接种量接种到发酵培养基中，厌氧培养16-24h，每升发酵培养基配方包括：80-150g蔗糖、80-150g酵母浸膏、2-7g柠檬酸铵、5-9g乙酸钠、2-6g磷酸氢二钾、0.2-0.6g硫酸锰、0.5-0.8g硫酸镁和1-3g吐温80，配置时用磷酸调pH至5.5-6.2后得到发酵培养基；

(3)在步骤(2)发酵进行到4h，每升发酵培养基中加入浓度为1g/L亚硒酸钠溶液1.1-3.3ml；发酵进行到12-16h,每升发酵培养基补加浓度为1g/L亚硒酸钠溶液1.1-3.3ml，发酵进行到20-24h后发酵完成，得到终点发酵液。

2.如权利要求1所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于，还包括步骤(4)：在步骤(3)中的终点发酵液中添加稳定剂，制得富硒罗伊氏乳杆菌营养液；

所述稳定剂为果胶、明胶、变性淀粉、速溶琼脂、乳蛋白、羧甲基纤维素纳、耐酸CMC、藻酸丙二醇酯、黄原胶、卡拉胶、瓜尔豆胶、阿拉伯胶中多种的组合或者其中一种。

3.如权利要求2所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于：所述乳蛋白包括酪蛋白酸钠和/或乳清蛋白。

4.如权利要求2所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于，在步骤(4)中，富硒罗伊氏乳杆菌营养液活菌数为(0.8-5)×1010CFU/ml，硒含量为1400-3000μg/L。

5.如权利要求1所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于，还包括步骤(4)：将步骤(3)中的终点发酵液进行过滤，过滤后得到富硒罗伊氏乳杆菌的菌体，然后添加冻干保护剂，将添加了冻干保护剂的菌体进行冷冻干燥，冷冻干燥后得到富硒罗伊氏乳杆菌活菌制剂；

所述冻干保护剂为甘油、山梨醇、甘露醇、蔗糖、海藻糖、聚乙烯比咯烷酮、葡聚糖、奶粉、维生素E中的多种的组合或其中一种。

6.如权利要求5所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于：在步骤(4)中，通过平板菌落计数法测得，富硒罗伊氏乳杆菌活菌制剂的活菌数为(0.1-5)×1012CFU/g，硒含量为126-260μg/g。

7.如权利要求1所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于：在步骤(3)中，通过平板菌落计数法测得，罗伊氏乳杆菌在发酵培养基中培养18h时，活菌数为(0.8-5)×1010CFU/ml；

发酵完成后，终点发酵液的硒含量为1200-3000μg/L，菌体硒含量为126-260μg/g。

8.如权利要求1所述的一种富硒罗伊氏乳杆菌高密度发酵的方法，其特征在于：在步骤(3)中，将终点发酵液进行离心、冷冻干燥后得到富硒罗伊氏乳杆菌的菌体，菌体干重为9-12g/L。