[发明专利]一种定量检测降钙素原的试剂盒及制备方法

说明书

本发明提供了一种定量检测降钙素原的试剂盒，试剂盒包括：碱性磷酸酶标记的降钙素原的单克隆抗体；生物素标记的降钙素原的单克隆抗体；包被有链霉亲和素的载体；降钙素原校准品；上述碱性磷酸酶所作用的化学发光底物。同时，试剂盒的制备方法包括：用碱性磷酸酶标记降钙素原的单克隆抗体；以生物素标记降钙素原的单克隆抗体；以降钙素原的单克隆抗体包被载体；以降钙素原纯品配制降钙素原校准品；分装上校准品、碱性磷酸酶标记的降钙素原的单克隆抗体、生物素化抗体和化学发光底物；组装为成品。本发明的试剂盒灵敏度高，特异性好，定量检测结果准确度高，使用成本低，更易推广应用。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，特别涉及一种定量检测降钙素原的试剂盒及制备方法。

背景技术

降钙素原 （PCT，procalcitonin）是一种蛋白质，在正常及健康的个体中，其血清浓度极低，仅为10-50pg/ml，一般方法检测不到。在全身性细菌、真菌及寄生虫感染，系统炎症反应综合症、败血症、急慢性肺炎、急性胰腺炎、活动性肝炎、创伤等患者的血清PCT水平异常增高，其浓度科大正常水平的几倍甚至上万倍；在病毒感染，自身免疫性疾病，器官移植排除反应等患者的血清浓度不增高或轻微增高。这就决定了PCT的高度特异性，因此可用于此类疾病的鉴别诊断，在全身性细菌感染和脓毒症辅助鉴别诊断、预后判断、疗效观察等方面有很高的临床价值，可广泛用于ICU病房、血液科、外科、内科、器官移植科、治疗实验室等。

现有技术检测血清学指标的方法主要包括放射性同位素免疫分析、生化免疫比浊的方法分析、酶联免疫吸附方法和化学发光免疫分析。放射免疫分析须用125I等放射性元素标记，检测设备复杂，其放射性核素的半衰期短，不能长期保存，测定结果不稳定，同时也给实验操作人员带来了放射性伤害。免疫比浊的方法，该方法检测灵敏度低，溶液受环境的影响。酶联免疫分析检测灵敏度不够高，检测范围窄，影响因素较多，易造成假阴性和假阳性等缺点也不能满足临床的要求。

发明内容

本方案通过提供一种定量检测降钙素原的试剂盒及制备方法，解决现有技术的检测灵敏度低，特异性差，检查范围窄的缺点。本发明研制的降钙素原测定试剂盒（化学发光法）采用的是双抗体夹心的反应模式，并且引入了生物素链霉亲和素系统，生物素与亲和素之间高亲合力的牢固结合以及多级放大效应，使免疫标记和有关示踪分析更加灵敏，降钙素原特异性的单克隆抗体纯度高、无传染性，非特异结合反应小，可以大批量生产，同时本发明的试剂盒灵敏度高，特异性好，定量检测结果准确度高，使用成本低，更易推广应用。

一方面，本发明提供了一种定量检测降钙素原的试剂盒，本发明的试剂盒包括：

（1）碱性磷酸酶标记的降钙素原的单克隆抗体；

（2）生物素标记的降钙素原的单克隆抗体

（3）包被有链霉亲和素的载体；

（4）降钙素原校准品；

（5）上述碱性磷酸酶所作用的化学发光底物。

另一方面，本发明提供了一种定量检测降钙素原的试剂盒的制备方法，该方法包括：

（1）用碱性磷酸酶标记降钙素原的单克隆抗体；

（2）以生物素标记降钙素原的单克隆抗体；

（3）以链霉亲和素包被载体；

（4）以降钙素原纯品配制降钙素原校准品；

（5）分装上述降钙素原校准品、碱性磷酸酶标记的降钙素原的单克隆抗体、生物素化抗体和化学发光底物；

（6）组装为成品。

在上述根据本发明的试剂盒及其制备方法中，所述载体可以为固相载体、磁性微粒、微孔板、塑料管或塑料珠。