[发明专利]一种石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗及其应用

权利要求书

1.一种石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗，其特征在于，所述的石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗是SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽。

2.根据权利要求1所述的重组囊膜蛋白疫苗，其特征在于，是所述的SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽与佐剂氢氧化铝混合形成石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗。

3.一种石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗的制备方法，其特征在于，将SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列转入到表达载体中，再将此表达载体转入宿主菌中，表达SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽，然后纯化收集此多肽，即得石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的表达载体为质粒pET-32a。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述的石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗是通过以下方法制备的：

1)质粒pET-32a-VP88的构建：将质粒pET-32a用EcoR I/Sal I酶切，回收5.9kb片段；以新加坡石斑鱼虹彩病毒SGIV基因组DNA为模板，用引物VP88-F和VP88-R进行PCR扩增，产物纯化后用EcoR I/Sal I酶切，回收1.5kb片段，将其与上述5.9kb片段连接，连接液转化大肠杆菌DH5α后在含氨苄青霉素的LB固体培养基上培养，并筛选转化子提取质粒，即为质粒pET32a-VP88；

所述引物VP88-F为5’-GCGAATTCATGGGCGCAGCGCAATC-3’，引物VP88-R为5’-GCGTCGACTCACTTTGCAGCTTCTC-3’；

2)疫苗蛋白的诱导表达和纯化：将质粒pET-32a-VP88转化大肠杆菌BL21(DE3)，得转化子BL21/pET32a-VP88；将BL21/pET32a-VP88于含有氨苄青霉素的LB液体培养基中过夜培养；取过夜后的培养液加入LB液体培养基中，于37℃培养至OD600为0.6，加入终浓度为0.8mM的IPTG并于16℃继续培养6h，然后在离心后菌液中加入PBS缓冲液，采用超声波破碎菌体1-2小时，将菌体破碎液离心，回收上清；将上清液中的重组蛋白采用His·Tag树脂亲合层析纯化方法纯化,即得SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽，即为石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的步骤2)中的将菌体破碎液离心，回收上清，再将上清液10倍体积与1倍体积His·Tag树脂结合，装载到层析柱，然后用15倍体积的结合缓冲液冲洗层析柱中结合了重组蛋白的His·Tag树脂，洗去杂蛋白，然后用10倍体积的洗脱缓冲液洗脱目的蛋白，收集洗脱液，即得SEQ ID NO.1核苷酸序列编码的多肽，即为石斑鱼虹彩病毒的重组囊膜蛋白疫苗。

8.SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列编码的多肽在制备石斑鱼彩虹病毒的疫苗中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的石斑鱼彩虹病毒的疫苗为新加坡石斑鱼彩虹病毒的疫苗。