[发明专利]一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法

说明书

本发明提供了一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法，设计了SSR分子标记引物SSR09133，以不结球白菜的DNA作为模板进行扩增，可以将未知品种的不结球白菜与苏州青、矮脚黄、乌塌菜三个品种区分开来。本方法不受植株生长发育阶段和环境的影响，具有准确性高、重复性好、操作简单、耗时短的优点，具有较高的商业应用前景，值得大范围推广。

技术领域

本发明属于蔬菜品种鉴定与良种技术领域，具体涉及一种用于鉴定不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜的分子标记方法。

背景技术

我国是农业大国和用种大国，农作物种业已经成为国家战略性和基础性核心产业，而种子质量更是促进农业长期稳定发展、保障国家粮食安全的根本。近半个世纪以来，我国在种业科技研究等方面取得了很大的成就。然而，随着农作物育种事业的迅猛发展，品种数目急剧增加，给种子市场管理提出了挑战。田间小区种植鉴定是法定的品种鉴定方法，虽然具有准确性、科学性等优点，但也存在工作量大，成本高，时间长，结果滞后等明显不足。此外，人为造假、掺假等假冒伪劣种子也导致了大量侵害农业生产的事故。

发明内容

解决的技术问题：本发明基于现有不结球白菜品种鉴定采用田间小区种植鉴定方法中存在的工作量大、成本高、时间长、结果滞后等明显不足，使用SSR分子标记技术进行鉴定，并具有高效、准确、不受环境条件影响、实验操作简单等优点。

技术方案：

一种不结球白菜的SSR分子标记引物，其序列为：

SSR09133-F：5’-CTGACGGCAACCATAGAAGA-3’(SEQ ID NO.1)，

SSR09133-R：5’-ACAGTCGTGAGGTTCCCTTT-3’(SEQ ID NO.2)。

上述引物用于鉴定不结球白菜的分子标记方法，包括以下步骤：

步骤1，提取待鉴定不结球白菜的DNA；

步骤2，以步骤1提取的DNA作为模板，用上述引物对其进行PCR扩增；

步骤3，对步骤2的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测；

结果判断标准如下：检测的产物条带与苏州青、矮脚黄、乌塌菜中的一个条带一致，并且与其他两个条带存在多态性，则证明该检测样本与条带一致的品种为同一品种。

进一步地，步骤2中的PCR扩增体系包括：2×Taq MasterMix、10μM正向SSR引物、10μM反向SSR引物、50ng/μL DNA模板、去离子水。

进一步地，步骤2中的PCR扩增体系为10μL扩增体系，具体包括：2×Taq MasterMix5μL、10μM正向SSR引物1μL、10μM反向SSR引物1μL、50ng/μL DNA模板1μL、去离子水2μL。

进一步地，步骤2中PCR扩增程序为94℃预变性5min，然后94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸1min20s，共28个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

进一步地，步骤3中采用8％非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行检测。

上述引物在不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜鉴定中的应用。

有益效果：本发明利用开发的SSR分子标记引物对及其检测方法可以将不结球白菜苏州青、矮脚黄、乌塌菜三个品种同时区分开来。本方法不受植株生长发育阶段和环境的影响，具有准确性高、重复性好、操作简单、耗时短的优点，具有较高的商业应用前景，值得大范围推广。

附图说明