[发明专利]用于将多肽负荷从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的合理设计的合成肽穿梭剂，其用途、与其相关的方法和试剂盒

权利要求书

1.一种用于将多肽负荷从细胞外空间递送至靶真核细胞的胞质溶胶和/或细胞核的方法，所述方法包括在穿梭剂存在下使所述靶真核细胞与所述多肽负荷接触，与不存在所述穿梭剂相比，所述穿梭剂的浓度足以使所述多肽负荷的转导效率提高，其中所述穿梭剂是：

(1)长度至少为20个氨基酸的肽，其包含：

(2)具有带正电荷的亲水外表面的两亲性α-螺旋基序，和

(3)疏水外表面，

其中，涉及以下参数(4)至(15)中的至少五个：

(4)基于每圈有3.6个残基的α-螺旋的开口圆柱形表示，所述疏水外表面包含由空间上相邻的L、I、F、V、W和/或M氨基酸组成的高疏水性核心，所述氨基酸代表所述肽的12％至50％的氨基酸；

(5)所述肽的疏水力矩(μ)为3.5至11；

(6)所述肽在生理pH下的预测静电荷为至少+4；

(7)所述肽的等电点(pI)为8至13；

(8)所述肽由35％至65％的氨基酸A、C、G、I、L、M、F、P、W、Y和V的任何组合组成；

(9)所述肽由0％至30％的氨基酸N、Q、S和T的任何组合组成；

(10)所述肽由35％至85％的氨基酸A、L、K或R的任何组合组成；

(11)所述肽由15％至45％的氨基酸A和L的任何组合组成，条件是肽中存在至少5％的L；

(12)所述肽由20％至45％的氨基酸K和R的任何组合组成；

(13)所述肽由0％至10％的氨基酸D和E的任何组合组成；

(14)所述肽中A和L残基的百分比(％A+L)与所述肽中K和R残基的百分比(K+R)之间的差异小于或等于10％；且

(15)所述肽由10％至45％的氨基酸Q、Y、W、P、I、S、G、V、F、E、D、C、M、N、T和H的任何组合组成。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述穿梭剂涉及参数(4)至(15)中的至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少十个、至少十一个，或涉及所有参数(4)至(15)。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中：

(i)所述穿梭剂是肽，其最小长度为20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个氨基酸，并且最大长度为35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、105、110、115、120、125、130、135、140、145或150个氨基酸；

(ii)所述两亲性α-螺旋基序的疏水力矩(μ)在3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0的下限和9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5、10.6、10.7、10.8、10.9或11.0的上限之间；

(iii)所述两亲性α-螺旋基序包括带正电荷的亲水外表面，基于连续氨基酸之间的旋转角为100度的α-螺旋和/或每圈有3.6个残基的α-螺旋，所述亲水外表面包括：(a)在螺旋轮投影时的至少两个、三个或四个相邻的带正电荷的K和/或R残基；和/或(b)在螺旋轮投影时的包含三至五个K和/或R残基的六个相邻残基的区段；

(iv)所述两亲性α-螺旋基序包括疏水外表面，基于连续氨基酸之间的旋转角为100度的α-螺旋和/或每圈有3.6个残基的α-螺旋，所述疏水外表面包括：(a)在螺旋轮投影时的至少两个相邻L残基；和/或(b)在螺旋轮投影时的包含选自：L、I、F、V、W和M的至少五个疏水残基的十个相邻残基的区段；

(v)所述疏水性外表面包含由空间上相邻的L，I，F，V，W和/或M氨基酸组成的高疏水性核心，所述氨基酸代表所述肽的12.5％、13％、13.5％、14％、14.5％、15％、15.5％、16％、16.5％、17％、17.5％、18％、18.5％、19％、19.5％或20％至25％、30％、35％、40％或45％的氨基酸；

(vi)所述肽的疏水力矩(μ)在4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0的下限和9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、10.1、10.2、10.3、10.4、10.5的上限之间；

(vii)所述肽的预测净电荷在+4、+5、+6、+7、+8、+9、+10、+11、+12、+13、+14或+15之间；

(viii)所述肽的预测pI为10-13；或

(ix)(i)至(viii)的任何组合。