[发明专利]用于降低脂蛋白颗粒对动脉壁酶引起的致动脉粥样硬化性聚集的敏感度的方法和试剂盒

说明书

降低人或其他动物中致动脉粥样硬化性颗粒对由鞘磷脂酶引起的聚集的敏感度的方法，所述方法包括向所述动物施用囊泡。还有类似的针对胆固醇结晶体的形成、细胞膜的异常胆固醇富集和ApoB的变性的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2016年9月1日提交的美国临时申请序列号62/382,368的权益。前述临时申请的整个公开以其整体并入本文引作参考。

技术领域

本发明的领域为降低人体内低密度脂蛋白颗粒(LDL)和类似颗粒对动脉壁酶(诸如鞘磷脂酶)引起的聚集的敏感度。

背景技术

降低人体内动脉粥样硬化性损伤的程度的能力是现代医学的重大目标。

尽管血浆LDL-降低疗法在治疗动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD)中的成功，用最佳的他汀类疗法(1，2)以及甚至新的PCSK9抑制剂(3，4)治疗的患者表现出对ASCVD事件的相当大的剩余风险。对目前的降低血浆LDL水平的手段之外的新方法存在需求。

低密度脂蛋白颗粒(LDL)和相关致动脉粥样硬化性脂蛋白通常进入并且离开动脉壁。动脉粥样硬化由一定比例的这些脂蛋白滞留或陷入在动脉壁内引起，主要通过它们与动脉内膜中的细胞外基质分子(特别是蛋白多糖)的结合(5)。滞留的致动脉粥样硬化性脂蛋白产生变化，并且主要变化是聚集(还可以包括颗粒融合的过程)(6)。一旦这些脂蛋白(其每一个包含一分子的载脂蛋白B(apoB))变得聚集，它们从动脉壁离开就变得不太可能。它们的移动在空间上受其较大的尺寸的阻碍，并且它们对动脉基质的亲和力增加。此外，聚集的apoB-脂蛋白被局部的巨噬细胞贪婪地(avidly)摄取，对其加载胆固醇，从而产生“泡沫细胞”(动脉粥样硬化的一种标志)。因此，动脉壁内LDL和相关脂蛋白的聚集是动脉粥样硬化的发展和进展的关键步骤。

这种聚集似乎由鞘磷脂酶(SM酶)介导：在高胆固醇血小鼠中，分泌型SM酶(酸性鞘磷脂酶基因的产物)的缺乏通过动脉壁内的作用与LDL滞留和动脉粥样硬化性损伤的减少相关联，而不改变apoB-脂蛋白的血浆浓度(7)。其他动脉壁酶也可以做出贡献，诸如其他磷脂酶(诸如磷脂酶A₂)和脂蛋白脂酶(后者主要作为物理桥梁)。对改变体内LDL和相关脂蛋白的方法存在需要，以使这些颗粒对聚集大大地不敏感，从而使致动脉粥样硬化性较低。

已经显示磷脂(“PL”)诸如卵磷脂(磷脂酰胆碱)在水性介质中的分散导致PL自组装进复层脂质体，即包括同心球面双分子层的囊泡(也被称为复层囊泡或MLV)。多种制备方法，诸如挤出(例如挤出机)和高剪切和/或高压方法(例如均化技术)，可以用来产生指定尺寸的单层囊泡(意味着包括单个脂质双分子层的囊泡)。根据习惯命名法，至少50nm直径的单层囊泡在本文被称为大的‘空’囊泡(LEV)，因为它们不需要包含包封的药物用于本文的应用(尽管如此，也构思了包封的药物)。LEV有时候也被称为大的单层囊泡(LUV)，相对于小的单层囊泡(SUV)，其直径通常为约30nm。胃肠外(通常静脉内)施用至实验动物或人受试者后，甚至足够剂量的无胆固醇或低胆固醇LEV在循环中保持为完整颗粒，并且具有从外周组织抽取胆固醇的能力(参见(8)中的讨论)。

然而，之前未表明LEV对于LDL和相关致动脉粥样硬化性颗粒(具有载脂蛋白B作为它们主要载脂蛋白的那些颗粒)对SM酶引起的聚集的敏感度的影响。这样的验证会是有用的，因为它会产生另外的用于针对动脉粥样硬化性损伤的发展和进展的治疗干预的方法。本发明基于这样的验证：其测量血浆LDL对SM酶引起的聚集的体外敏感度。将看到，在来自LEV处理的动物的LDL中，这种敏感度已经大大降低。