[发明专利]基于补体因子的亲和层析

说明书

本文报道了根据式I(TAG‑X1‑C1qA‑X2‑C1qB‑X3‑C1qC‑X4)的融合多肽，其包含SEQ ID NO：01(C1qA)的片段，SEQ ID NO：03的片段(C1qB)，SEQ ID NO：05的片段(C1qC)和任选的标签(TAG)。

本文报道了使用包含固定化的人C1q作为亲和配体的亲和层析柱及其用途。

背景

免疫球蛋白通常包含两个所谓的轻链多肽(轻链)和两个所谓的重链多肽(重链)。每个重链和轻链多肽含有可变结构域(可变区)(通常是多肽链的氨基末端部分)，其包含能够与抗原相互作用的结合区。每个重链和轻链多肽包含恒定区(通常是羧基末端部分)。重链的恒定区介导抗体i)与携带Fcγ受体(FcγR)的细胞(例如吞噬细胞)或ii)携带新生Fc受体(FcRn)(也称为Brambell受体)的细胞的结合。它还介导与某些因子的结合，包括经典补体系统的因子，如组分(C1q)。

人的先天免疫包括补体途径。该途径通过C1q(C1补体因子的识别亚基)与免疫靶标的结合而被激活。完整的C1q分子是包含三个单体结构单元(其表示为C1qA，C1qB和C1qC)中的每一个的六个拷贝的异聚体分子。每个单体单元包含N末端区域(3至9个残基)，胶原样结构域(跨越约81个残基)和球状结构域(球状头；跨越约135个残基)(Sellar，GC，等人，Biochem.J.274(1991)481-490)。C1q具有识别单元的功能，并且可以结合IgG1的CH2结构域以及IgM的CH3或CH4结构域(Ghebrehiwet，B.等人，J.Exp.Med.160(1984)1375-1389)。

在WO2010/048313中，报道了用于纯化含Fc融合蛋白的重组FcRn及其变体。Magistrelli，G.等人报道了在哺乳动物细胞中稳健的重组FcRn产生，使得能够进行定向固定用于IgG结合研究(J.Immunol.Meth.371(2012)20-29)。在WO2013/120929中报道了新生Fc受体(FcRn)和β-2-微球蛋白(b2m)的固定化非共价复合体通常作为亲和层析配体的用途，并且例如通过测定抗体和参照抗体的保留时间的比率用于测定抗体的体内半寿期。

使用具有固定化人IgG的亲和层析法纯化人C1q(参见例如Assimeh，S.N等人，J.Immunol.113(1974)225-234；Kolb，W.P等人，J.Immunol.122(1979)2103-2111)。

Bally，I.，等人报道了全长人C1q的产生，其涉及HEK 293-F哺乳动物细胞的稳定转染和亲和标签与C链的C末端的融合(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 110(2013)8650-8655)。据报道，从生物化学和结构分析判断，所得重组(r)C1q分子与血清C1q相似，并且应显示出一束花的特征形状。通过表面等离振子共振分析其相互作用性质表明rC1q保留了血清C1q与C1s-C1r-C1r-C1s四聚体结合的能力，以识别生理C1q配体如IgG。亲和标签用于纯化重组C1q。