[发明专利]用于产生具有体内血管形成能力的中胚层和/或内皮集落形成细胞样细胞的方法

权利要求书

1.一种用于从人多能干细胞产生分离的人KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞的群体的方法，所述方法包括：

-提供多能干细胞(PSC)；

-诱导所述多能干细胞以经历中胚层分化，其中中胚层诱导包括：

i)在包含激活素A、BMP-4、VEGF和FGF-2的中胚层分化培养基中培养所述多能干细胞持续约24小时；和

ii)此后约每24小时-48小时用包含BMP-4、VEGF和FGF-2的中胚层分化培养基替换步骤i)的所述培养基，持续约72小时；和

-从被诱导以经历分化的细胞中分离中胚层细胞，其中中胚层细胞的所述分离包括：

iii)分选所述中胚层细胞以选择KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺细胞。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述分选还包括选择SSEA5^-KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺细胞。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述中胚层诱导还包括使经历中胚层诱导的所述细胞与Fc-NRP-1接触。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述Fc-NRP-1被添加到步骤ii)的所述中胚层分化培养基中。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述中胚层诱导还包括使经历中胚层诱导的所述细胞与一种或更多种miRNA抑制剂接触，其中所述一种或更多种miRNA抑制剂抑制在SSEA5^-KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞中呈现出相对于PSC降低的表达的miRNA。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述miRNA抑制剂抑制选自由以下组成的组的miRNA：miR-221-3p、miR-1271-5p、miR-559、miR543、miR-361-3p、miR-30d-5p、miR-124-3p和miR-185-5p。

7.如权利要求5所述的方法，其中经历中胚层诱导的所述细胞与miR-221-3p、miR-1271-5p和miR-559，优选地miR-221-3p的miRNA抑制剂中的一种或更多种接触。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述中胚层诱导还包括使经历中胚层诱导的所述细胞与一种或更多种miRNA模拟物接触，其中所述一种或更多种miRNA模拟物模拟在SSEA5^-KDR⁺NCAM⁺APLNR⁺中胚层细胞中呈现出相对于PSC增加的表达的miRNA。

9.如权利要求8所述的方法，其中所述miRNA模拟物模拟选自由以下组成的组的miRNA：miR-330-5p、miR-145-5p、miT-214-3p和miR-497-5p。

10.如权利要求7所述的方法，其中经历中胚层诱导的所述细胞与miR-330-5p、miR-145-5p和miT-214-3p，优选地miR-330-5p的miRNA模拟物中的一种或更多种一起培养。

11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述中胚层诱导还包括使经历中胚层诱导的所述细胞与miR-214模拟物接触。

12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中所述分离的中胚层细胞在被植入到哺乳动物中时具有形成血管的能力。