[发明专利]基因组编辑

权利要求书

1.一种方法，包括：

a)提供宿主细胞

所述宿主细胞包括附加型复制子，

所述附加型复制子包括供体核酸序列，

所述宿主细胞还包括靶标核酸，

b)提供能够在所述宿主细胞中支持核酸重组的辅助蛋白

c)提供能够在所述宿主细胞中支持核酸切除的辅助蛋白和/或RNA

其中所述供体核酸序列依次包括：5'-同源重组序列1-感兴趣的序列-同源重组序列2-3'

其中所述感兴趣的序列包括正选择标记

d)诱导所述供体核酸序列的切除

e)孵育以允许切除的供体核酸和所述靶标核酸之间的重组

f)选择已将所述供体核酸掺入所述靶标核酸的重组体。

2.根据权利要求1的方法，其中所述靶标核酸依次包括：5'-同源重组序列1-负选择标记-同源重组序列2-3'。

3.根据权利要求2的方法，其中所述选择已将所述供体核酸掺入所述靶标核酸的重组体，包括选择供体核酸的正选择标记的获得和靶标核酸的负选择标记的丢失。

4.根据权利要求3的方法，其中同时选择供体核酸的正选择标记的获得，和靶标核酸的负选择标记的丢失。

5.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述感兴趣的序列包括正选择标记和负选择标记。

6.根据前述任一权利要求所述的方法，还包括步骤

dii)在靶标核酸序列中诱导至少一个双链断裂，其中所述双链断裂在所述同源重组序列1和所述同源重组序列2之间。

7.根据权利要求6的方法，其中在靶核酸序列中诱导至少两个双链断裂，其中每个所述双链断裂在所述同源重组序列1和所述同源重组序列2之间。

8.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述切除的供体核酸开始于所述同源重组序列1，结束于所述同源重组序列2。

9.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述附加型复制子包括独立于供体核酸序列的负选择标记。

10.根据权利要求9的方法，其中所述方法还包括通过选择独立于供体核酸序列的所述负选择标记的缺失，来选择附加型复制子的丢失的步骤。

11.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述附加型复制子依次包括：切除切割位点1-供体核酸序列-切除切割位点2。

12.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶标核酸具有能够在所述宿主细胞内起作用的其自身复制起点。

13.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述附加型复制子是质粒核酸。

14.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶标核酸是质粒核酸。

15.根据权利要求13或14的方法，其中所述附加型复制子是第一质粒核酸，并且所述靶标核酸是第二质粒核酸。

16.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述附加型复制子是细菌人工染色体(BAC)。

17.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶标核酸是细菌人工染色体(BAC)。

18.根据权利要求16或17的方法，其中所述附加型复制子是第一细菌人工染色体(BAC)，并且所述靶标核酸是第二细菌人工染色体(BAC)。

19.根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述靶标核酸是宿主细胞基因组。