[发明专利]具有单结构域抗体的嵌合抗原受体

说明书

本发明涉及嵌合抗原受体(CAR)和表达这种CAR的细胞，其中CAR包含一个或多个单人可变结构域抗体。特别地，本发明涉及包含多个单人可变结构域抗体的CAR。在一个具体实施方案中，所述一个或多个单人可变结构域抗体与前列腺膜抗原结合。

技术领域

本发明涉及包含一个或多个单结构域抗体的嵌合抗原受体(CARs)，其中所述结构域为人可变重链(V_H)结构域，其特别用于治疗前列腺癌。CARs能够利用结合配体的结构域特性将免疫细胞特异性和反应性重新定向到选定的靶标。本发明还涉及包含多个人单V_H结构域抗体的CAR。

本发明进一步涉及编码本发明CAR的多核苷酸、编码这些多肽的载体以及在其表面表达本发明CAR的分离细胞。此类细胞可用于治疗，特别是用于治疗癌症。治疗疾病(例如癌症)的方法也在本发明的范围内。

背景技术

过继性细胞疗法(ACT)作为癌症治疗技术受到了广泛关注。一种ACT治疗方法涉及T细胞的基因工程以在T细胞的表面上表达嵌合抗原受体(CARs)以使得能够靶向特定肿瘤。一旦CAR在T细胞中表达，CAR修饰的T细胞(CAR-T或CAR-T细胞)会获得包括抗原特异性识别、活化和增殖的特性，因此细胞充当“活的药物”。因此，在T细胞中表达CAR的目的是将细胞的免疫反应性重新定向到选定的靶标。此外，具有不同强度和信号传导的CARs还可以调节T细胞扩增以及改变T细胞活化的强度。

CARs是合成受体，通常由与单个融合分子中的一个或多个信号传导结构域相关的靶向/结合部分组成。CAR的结合部分通常由包含通过柔性接头连接的单克隆抗体的轻链和重链可变片段的单链抗体(scFv)的抗原结合结构域组成。scFv保留与其衍生自的完整抗体相同的特异性和相似的亲和性，并且能够结合感兴趣的特定靶标。

CARs在单个融合分子中结合了抗原特异性和T细胞活化特性。第一代CARs通常包括CD3ζ的细胞质区域或Fc受体γ链作为其信号传导结构域。第一代CARs已经在卵巢癌、肾癌、淋巴瘤和神经母细胞瘤患者的I期临床研究中进行了测试，其中它们诱导了适度的反应(Sadelain等人在Curr Opin Immunol，21(2)：215-223，2009中进行了综述)。包含CD28和CD3ζ的信号传导结构域的第二代CARs提供双重信号传导以定向组合的激活和共刺激信号。第三代CARs更复杂，具有三个或更多信号传导结构域(Sadelain等人在Cancer Discovery(3)，388-398，2013和Dotti等人在Immuno.Rev，257(1)，1-36，2014中进行了综述)。

前列腺癌是发达国家男性中最常诊断的非皮肤相关恶性肿瘤。据估计，六分之一的男性将被诊断患有前列腺癌。目前对前列腺癌的治疗包括手术、放射和辅助激素疗法。尽管这些疗法在疾病的早期阶段相对有效，但最初被诊断患有局部前列腺癌的大多数患者最终复发。虽然化疗是对抗晚期前列腺癌最广泛使用的方法之一，但由于缺乏特异性和相关毒性，其治疗效果通常不足。缺乏向前列腺癌细胞的靶向输送是实现可行治疗效果的主要障碍之一。因此，仍然迫切需要提高抗前列腺癌药物选择性的策略(Barve等人，J ControlRelease.2014年8月10日；0：118-132)。

在使用基于血清的标志物如前列腺特异性抗原(PSA)后，前列腺癌的诊断已经大大改善。此外，前列腺肿瘤相关抗原为肿瘤成像、诊断和靶向治疗提供了靶点。前列腺特异性膜抗原(PSMA)是一种前列腺肿瘤相关标志物，它就是这样的靶点。已经产生了使用基于scFv的结合部分的PSMA特异性CAR-Ts用来治疗前列腺癌(Zuccolotto等人，PLOS One(9)，e109427 2014)。