[发明专利]包含负载蛋白的外泌体的组合物以及制备和递送该组合物的方法

权利要求书

1.一种用于大量产生在膜上包含货物蛋白的外泌体的方法，包括以下步骤：

a)通过在外泌体产生细胞中导入编码由外泌体特异性标记物和货物蛋白组成的融合蛋白的多核苷酸来制备转化细胞；

b)培养步骤a)的所述的转化细胞；以及

c)将所述货物蛋白分离到外泌体膜内侧。

2.根据权利要求1所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述货物蛋白是抑制NF-κB的超阻遏物IκB蛋白、Bax(Bcl-2相关X蛋白)、过氧化物氧化还原酶I、过氧化物氧化还原酶II、cre重组酶、Cas9(CRISPR相关蛋白9)、Cpf1(来自普雷沃菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR 1)或GBA(β-葡糖脑苷脂酶)。

3.根据权利要求1所述的用于大量产生外泌体的方法，其中，所述外泌体产生细胞是选自由B淋巴细胞、T淋巴细胞、树突状细胞、巨核细胞、巨噬细胞、干细胞和肿瘤细胞组成的组的一个或多个细胞。

4.根据权利要求1所述的用于大量产生外泌体的方法，其中，所述外泌体特异性标记物是CD9、CD63、CD81或CD82。

5.一种用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，包括以下步骤：

(a)在外泌体产生细胞中导入编码融合蛋白(融合蛋白I)的多核苷酸和编码融合蛋白(融合蛋白II)的多核苷酸，所述融合蛋白I由外泌体特异性标记物和第一光特异性结合蛋白组成，所述融合蛋白II由货物蛋白和能够与所述第一光特异性结合蛋白连接的第二光特异性结合蛋白组成；

(b)用能够引起所述第一光特异性结合蛋白和所述第二光特异性结合蛋白之间缀合的光照射所述外泌体产生细胞；以及

(c)在所述外泌体产生细胞中完成生产外泌体后终止所述照射。

6.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述第一光特异性结合蛋白是选自由CIB(隐花色素相互作用碱性螺旋-环-螺旋蛋白)、CIBN(CIB的N末端结构域)、PhyB(光敏色素B)、PIF(光敏色素相互作用因子)、FKF1(黄素结合、Kelch重复、Fbox 1)、GIGANTEA、CRY(隐花色素)和PHR(光裂合酶同源区域)组成的组的一种或多种蛋白。

7.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为CIB或CIBN时，所述第二光特异性结合蛋白为CRY或PHR，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为460～490nm的光照射来实现。

8.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为PhyB时，所述第二光特异性结合蛋白为PIF，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为600～650nm的光照射来实现。

9.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，当所述第一光特异性结合蛋白为GIGANTEA时，所述第二光特异性结合蛋白为FKF1，并且所述第一光特异性结合蛋白与所述第二光特异性结合蛋白的结合通过用波长为460～490nm的光照射来实现。

10.根据权利要求5所述的用于大量产生包含货物蛋白的外泌体的方法，其中，所述货物蛋白是抑制NF-κB的超阻遏物IκB蛋白、Bax(Bcl-2相关的X蛋白)、过氧化物氧化还原酶I、过氧化物氧化还原酶II、cre重组酶、Cas9(CRISPR相关蛋白9)、Cpf1(来自普雷沃菌属和弗朗西斯氏菌属的CRISPR 1)或GBA(β-葡糖脑苷脂酶)。

11.使用由根据权利要求1或权利要求5所述的方法制备的外泌体将蛋白药物递送至胞质溶胶的方法。