[发明专利]氟苯尼考及氟苯尼考胺抗原、抗体及其同时检测酶联免疫分析方法

说明书

本发明公开了氟苯尼考及氟苯尼考胺抗原、抗体及其同时检测酶联免疫分析方法。本发明利用氟苯尼考作为半抗原与载体蛋白偶联获得人工抗原，作为包被原；同时在氟苯尼考分子苄羟基上衍生丁二酸半酯偶联手臂得到氟苯尼考半抗原，与载体蛋白偶联得到氟苯尼考人工抗原，作为免疫原；制备了检测抗体，并建立了酶联免疫检测方法，对于氟苯尼考的IC₅₀=37.10 ng/mL，线性检测范围为12.03～114.49 ng/mL，对于氟苯尼考胺IC₅₀=45.3 ng/mL，线性检测范围为10.76～190.69 ng/mL，具有灵敏度高，特异性好等显著优势，可用于快速检测食品中残留的氟苯尼考及氟苯尼考胺，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及氟苯尼考及氟苯尼考胺检测技术领域，更具体地，涉及一种氟苯尼考及氟苯尼考胺抗原、抗体及其同时检测酶联免疫分析方法。

背景技术

氟苯尼考(Florfenicol，C₁₂H₁₄Cl₂FNO₄S)属于氯霉素类广谱抗生素，广泛应用在水产养殖、畜牧、家禽疾病的治疗等领域。相对于氯霉素会给人体健康造成严重危害而被许多国家列为禁用药物，甲砜霉素会引起动物再生障碍性贫血等，氟苯尼考与氯霉素和甲砜霉素抗菌活性相似且用起来更安全。但是已有报道表明氟苯尼考具有一定的免疫毒性和胚胎毒性，目前已有许多国家对其在动物组织中的最大残留限量做了规定。氟苯尼考的不当使用及残留会危害到人类的健康，因此加强对动物产品中氟苯尼考的检测监控十分重要。

氟苯尼考在动物体内的最终代谢物主要是氟苯尼考胺，规定在检测氟苯尼考残留时将氟苯尼考胺作为残留标识物同时检测。目前氟苯尼考及氟苯尼考胺的分析方法主要是仪器检测方法，该方法准确可靠，常作为确证方法，但存在设备昂贵、需要专业人员、样品通量低等不足。免疫检测技术是基于抗原抗体特异性反应的分析方法，具有灵敏、快速、速高通量等特点，可与仪器确证技术搭配应对食品安全快速筛查需求，近年来已成为研究热点。研究氟苯尼考及氟苯尼考胺的酶联免疫检测方法，对于氟苯尼考及氟苯尼考胺规模化样品快筛和检测具有非常重要的经济和社会意义。

发明内容

本发明的第一个目的是提供氟苯尼考作为氟苯尼考和/或氟苯尼考胺半抗原的应用。

本发明的第二个目的是提供氟苯尼考在制备氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的人工抗原中的应用。

本发明的第三个目的是提供一种氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的人工抗原，。

本发明的第四个目的是提供氟苯尼考或所述人工抗原在检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺，或者在制备氟苯尼考和/或氟苯尼考胺测试剂盒中的应用。本发明的第五个目的是提供一种检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的免疫原与包被原组合。

本发明的第六个目的是提供一种检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的酶联免疫检测方法

本发明的第七个目的是一种氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的酶联免疫检测试剂盒。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

氟苯尼考(FF)作为氟苯尼考和/或氟苯尼考胺半抗原的应用，氟苯尼考的结构如下：

一种氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的人工抗原，所述人工抗原为中所述氟苯尼考与载体蛋白的偶联物，其结构如下：

优选地，所述载体蛋白为钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白或卵清蛋白。

所述氟苯尼考在制备氟苯尼考和/或氟苯尼考胺的人工抗原中的应用。

所述氟苯尼考或所述人工抗原在检测氟苯尼考和/或氟苯尼考胺，或者制备氟苯尼考和/或氟苯尼考胺测试剂盒中的应用。