[发明专利]活化部分凝血活酶时间测定试剂

说明书

本发明公开了一种活化部分凝血活酶时间测定试剂，包括缓冲液、激活剂、磷脂、抗氧化剂和稳定剂，pH值为7.0‑7.5；所述抗氧化剂包括虾青素，所述虾青素的添加量为0.1‑0.5g/L。上述试剂采用虾青素作为抗氧化剂能够有效的与过氧自由基发生反应，从而终止脂质的过氧化链反应，进一步提升了试剂的稳定性能。

技术领域

本发明涉及凝血试剂技术领域，特别是涉及一种活化部分凝血活酶时间测定试剂。

背景技术

血液凝固，或称为凝血指的是血液由液体状态转变为不流动的凝胶状态的过程，是生理性止血的重要环节。血液凝固的实质就是血浆中的可溶性纤维蛋白原变成不可溶的纤维蛋白的过程。凝血实验对于临床各科的疾病诊断具有很大的意义，除了对出血性疾病的筛选与诊断外，还用于对于各种血栓性疾病与血栓前状态的检查和预测；弥散性血管内凝血(DIC)的实验室诊断以及对各种抗凝治疗患者的用药指导和预后估计等。血栓与止血不仅涉及基础医学，且与多个临床学科(包括血液科、呼吸消化科、心血管科、神经科、妇产科、普通外科等)的疾病密切相关。总之，在血液病、糖尿病、高脂血症、心脑血管病、外科手术治疗等领域的研究、诊断与治疗方面，血栓与止血检验均有重要意义。

活化部分凝血活酶时间(APTT)是检测内源性凝血途径凝血因子异常的一项最常用、最敏感的筛选试验，广泛用于出血疾病的初筛诊断，肝素抗凝治疗的检测，狼疮抗凝因子的检测，过筛测定内源途径凝血因子的缺陷等。其主要的测定原理是：在37℃条件下，以激活剂激活Ⅻ，以脑磷脂(部分凝血活酶) 代替血小板第三因子，在Ca²⁺参与下，观察血浆凝固所需的时间，即为活化部分凝血活酶时间。其常用的激活剂有硅藻土、高岭土、二氧化硅微粒、鞣花酸等。不同的激活剂和磷脂对各种凝血因子缺陷、对肝素和对狼疮抗凝物质的敏感性相差很大，如高岭土对凝血因子最敏感、鞣花酸对狼疮抗凝物质敏感性最高。活化部分凝血活酶时间(APTT)延长多见于内源系统因子先天性缺乏，例如血友病，Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ缺乏或缺陷，严重的因子V、X减少或凝血酶原和纤维蛋白原缺乏。内源系统因子获得性缺乏或异常多见于肝病、DIC、血循环中抗凝物质存在。缩短见于因子Ⅷ、V活性增高、DIC高凝期、血栓性疾病(如心肌梗塞、脑血管病变、肺梗死、深静脉血栓形成等)、血小板增多症等。

目前，APTT激活剂大多是表面活性材料。作为液体活性材料有鞣花酸和它的衍生物，此类活性材料对肝素的灵敏度低；作为固体活化材料如高岭土，硅藻土等，其缺点是活化需要较长的潜伏期，且其均一性及悬浮性较差，如果出现沉淀会影响凝血检测终点的判定。磷脂是含有磷酸的脂类，属于复合脂。作为血小板的替代物，磷脂参与内源性凝血途径。作为活化部分凝血活酶时间测定试剂的主要组分之一，磷脂富含不饱和脂肪酸，容易被氧化从而形成过氧化物、丙二醛、脂肪酸及溶血卵磷脂，从而影响了其生理活性。

为了避免APTT测定试剂中磷脂的氧化，同时也为了制备稳定性较好的APTT 测定试剂，现有技术有加入氨基酸(甘氨酸)作为抗氧化剂。为了避免试剂中微生物和细菌的繁衍，有文献报道加入BHT和BHA作为抗氧化剂，主要是防止脂质的氧化，这两种物质都具有一定的毒性，尤其是BHT，因此在使用中受到限制；而叠氮钠的毒性较大，与铜管等接触容易引爆，增加了生产过程中原料的使用和控制难度。还有提出加入苯酚作为APTT试剂的稳定剂，但苯酚对于人体健康和环境都有破坏性的影响，也不利于安全生产，因此限制了其应用。另外，为了进一步提升APTT测定试剂的稳定性，还提出在试剂中加入多糖和多醇类聚合物，这类物质的加入，可以提高溶液的粘度，是胶体颗粒能够长期悬浮在溶液中不会沉降，然而，这类高分子化合物的加入，在提升混合液粘度的同时，也会降低采用光学法测定的APTT值的准确度。这些稳定剂的选择在液态凝血试剂方面，效果并不尽如意。

由于实验室使用APTT试剂质量上的不同，使得同一个患者在不同医院测定的结果相差悬殊，造成监测结果的不一致，影响对疾病的正确、及时诊断。因此APTT试剂的质量成了获得准确结果及诊断的关键。因此发明一种稳定性好、重复性佳、安全性高、能准确测量APTT的试剂很有必要，无疑将对临床诊断疾病有重要的作用。

发明内容