[发明专利]一种人间充质干细胞无血清培养基及其配制方法

权利要求书

1.一种人间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：所述培养基的主要成分包括基础培养基和添加物；所述添加物包括人血白蛋白(HSA），胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂（ITS），氢化可的松，维生素C（Vc），亚油酸，孕酮，丙酮酸钠，非必需氨基酸，必需氨基酸，碱性成纤维生长因子（bFGF），转化生长因子（TGF-β)。

2.如权利要求1所述的一种人间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：所述基础培养基为a-MEM，L-DMEM，或DMEM-F12中任一种。

3.如权利要求1所述的一种人间充质干细胞无血清培养基，其特征在于：所述无血清培养基中HSA的添加量为100-1000μg/L，ITS的添加量为1-10ml/L，维生素C的添加量为10-30mg/L，氢化可的松添加量为10-50μg/L，亚油酸的添加量为1-10mg/L，丙酮酸钠的添加量为50-150mg/L，孕酮的添加量为1-25μg/L，非必需氨基酸的添加量为10-20ml/L，必需氨基酸的添加量为10-20ml/L，bFGF的添加量为1-10μg/L，TGF-β的添加量为1-10μg/L。

4.如权利要求1所述的一种人间充质干细胞无血清培养基的配制方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、在超纯水中充分溶解培养基粉末，一边溶解一边搅拌，形成基础培养基溶液；

步骤二、在步骤一所得的基础培养溶液基中依次加入HAS，ITS，L-谷氨酰胺，丙酮酸钠，维生素C，非必需氨基酸，必需氨基酸，氢化可的松，亚油酸，孕酮，，bFGF，TGF-β，补加超纯水至1L，然后用0.22μm的滤膜过滤除菌，调整pH至7.0，4℃避光储存。

5.如权利要求4所述的一种人间充质干细胞无血清培养基的配制方法，其特征在于，具体配制通过如下步骤：

1）基础培养基的配制方法如下：

取800ml超纯水，边搅拌边倒入a-MEM培养基粉末，搅拌子转速50-150rpm，充分溶解后补加超纯水至1L，调整pH至7.0，4℃保存；

2）亚油酸的配制方法如下：

称取一定量的亚油酸用无水乙醇溶解，充分溶解后加入步骤1）基础培养基进行稀释，使终浓度为1g/L，作为亚油酸母液备用；

3）氢化可的松的配制方法如下：

称取一定量的氢化可的松用无水乙醇溶解，充分溶解后加入步骤1）基础培养基进行稀释，使终浓度为10mg/L，作为氢化可的松母液备用；

4）孕酮的配制方法如下：

称取一定量的孕酮用无水乙醇溶解，充分溶解后加入步骤1）基础培养基进行稀释，使终浓度为10mg/L，作为孕酮母液备用；

5）取800ml步骤1）基础培养基，依次加入所需量的HSA，ITS，L-谷氨酰胺，丙酮酸钠，非必需氨基酸，必需氨基酸，维生素C，亚油酸母液，氢化可的松母液，孕酮母液，bFGF，TGF-β，边加边搅拌，搅拌子转速50-150rpm，充分溶解后补加基础培养基至1L，然后用0.22μm的滤膜过滤除菌，调整pH至7.0，4℃避光储存。