[发明专利]一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法在审
| 申请号： | 201711370456.7 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108084258A | 公开（公告）日： | 2018-05-29 |
| 发明（设计）人： | 叶华虎;法云智;袁菊芳;周小军;王进;杨威;班兴;李鹏飞 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C07K14/765 | 分类号： | C07K14/765;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京创遇知识产权代理有限公司 11577 | 代理人： | 吕学文;武媛 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内毒素 白蛋白溶液 阴离子交换色谱法 白蛋白 工业化生产工艺 蛋白回收率 内毒素清除 添加物 残留量 大样品 回收率 放大 残留 回收 | ||
1.一种高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，所述方法包括：采用Triton-X114处理含内毒素的原始白蛋白溶液；通过阴离子交换色谱法回收白蛋白。
2.根据权利要求1所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，在含内毒素的原始白蛋白溶液中加入体积百分比为0.2～0.6％的Triton-X114，并在4～8℃的温度下搅拌12～16h。
3.根据权利要求2所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，在含内毒素的原始白蛋白溶液中加入体积百分比为0.3％的Triton-X114。
4.根据权利要求3所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，在4℃的温度下搅拌16h。
5.根据权利要求1所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，通过阴离子交换色谱法回收白蛋白进一步包括以下步骤：
(1)样品稀释：使用原始白蛋白溶液5倍体积以上的无内毒素的超纯水稀释采用Triton-X114处理后的白蛋白溶液，使白蛋白浓度≤20g/L，然后用1M的HCl或NaOH调节pH值为7.5～8.5；
(2)色谱柱填装填料：在色谱柱内填装弱阴离子树脂；
(3)色谱柱预处理：用3倍柱体积无内毒素且使用超纯水配置的0.5M NaOH清洗色谱柱，持续时间30～60min；
(4)色谱柱平衡：用3倍柱体积无内毒素且pH值为7.5～8.5的0.01M Tris-HCl溶液平衡色谱柱；
(5)色谱柱上样：将步骤(1)中稀释好的白蛋白溶液上样；
(6)色谱柱洗涤：用含0.08M NaCl且pH值为7.5～8.5的0.01M Tris-HCl溶液冲液洗涤色谱柱，当流穿液的OD值降至基线时，再采用5倍柱体积的上述含0.08M NaCl且pH值为7.5～8.5的0.01M Tris-HCl溶液洗涤色谱柱；
(7)白蛋白洗脱：用含0.4M NaCl且pH值为7.2的0.01M PB洗脱，收集洗脱液，即获得清除了内毒素的白蛋白溶液。
6.根据权利要求5所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，所述步骤(1)中，用1M的HCl或NaOH调节稀释后的样品的pH值为8.0。
7.根据权利要求5所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，弱阴离子树脂为快流速DEAE-琼脂糖凝胶。
8.根据权利要求5所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，采用3倍柱体积无内毒素且采用超纯水配置的0.5M NaOH清洗色谱柱的持续时间为45min。
9.根据权利要求5所述的高效便捷清除白蛋白溶液内毒素的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，Tris-HCl溶液的pH值为8.0。
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