[发明专利]一种酶活提高的L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.1所示。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.一种含有权利要求2所述基因的重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体切除了载体N端起始密码子后一段冗余序列并在C端添加6个组氨酸标签。

4.一种表达权利要求1所述L-天冬氨酸β-脱羧酶突变体的基因工程菌。

5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主。

6.一种制备权利要求4所述基因工程菌的方法，其特征在于，是在SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的基础上，将第484位亮氨酸突变成甲硫氨酸，得到重组基因，将重组基因连到表达载体得到重组质粒，重组质粒转化到大肠杆菌宿主菌中即得到大肠杆菌基因工程菌。

7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述方法具体是：(1)以SEQ ID NO.4所示核酸序列为模板，以序列如SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6所示的引物，进行PCR，得到编码的484位氨基酸由亮氨酸突变成甲硫氨酸的L484M突变体基因序列；(2)将步骤(1)得到的重组基因序列，连接到pET28a-M表达载体中，得到重组质粒L484M-pET28a-M，重组质粒化转化到大肠杆菌宿主中，获得重组大肠杆菌基因工程菌。

8.一种应用权利要求4所述的基因工程菌全细胞转化L-天冬氨酸生产L-丙氨酸的方法，其特征在于，所述方法是在pH为4-7的条件下，以基因工程菌全细胞作为催化剂，以L-天冬氨酸为底物转化生产L-丙氨酸。