[发明专利]一种非酒精性慢性脂肪性肝炎大鼠模型及其构建方法和用途

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种非酒精性慢性脂肪性肝炎（NASH）大鼠模型及其构建方法和用途。对成年大鼠饲喂蛋氨酸和胆碱缺乏的特殊饲料（MCD饲料）或胆碱缺乏的特殊高脂饲料（CDAA饲料），一定时间内给与动物一定量的亚硝酸钠溶液，构建得到非酒精性慢性脂肪性肝炎大鼠模型具有慢性肝纤维化和早期肝硬化特点。本发明所提供的大鼠模型构建过程简单，技术手段容易，构建成本低，具有极高的科研和药物研发所需的动物模型的价值，特别是作为在NASH伴有严重性肝纤维化和早期肝硬化阶段的特定动物模型，属于国内首创。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种非酒精性慢性脂肪性肝炎大鼠模型及其构建方法和用途。

背景技术

非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fattyliver disease， NAFLD)是为临床常见的肝脏疾病之一， 其中非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholic steatohepatitis， NASH)是非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver， NAFL)向非酒精性脂肪性肝硬化转化过程中一个非常重要的环节，是隐源性肝硬化的重要原因之一。研究表明，NASH 的预后不佳，约 50%的 NASH 患者随访 6 年后可进展成肝纤维化，10%-15%在10-20 年内可进展成肝硬化，而9%-26%在随访的 4-10 年内可因终末期肝病死亡。因此，研究NASH 的防治策略是目前国内外肝病界的热点之一。

NASH 的发病机制至今尚不完全清楚，需要通过大量的动物实验开展深入的研究。然而，目前国内外的 NASH 动物模型杂乱不一，缺少统一的标准，在一定程度上限制了NASH 病理机制及治疗药物的深入研究。非酒精性脂肪性肝炎(NASH)动物模型在探索疾病的发病机 制、评价诊断方法、筛选防治药物等领域均有重要作用。

近年来，许多学者利用实验动物复制非酒精性脂肪性肝炎病理模型并对其进行了大量的研究。目前国内外常用的非酒精性脂肪性肝炎动物模型，包括营养失调性、药物中毒性、特殊品系及复合因素诱导的脂肪肝模型。营养失调性脂肪肝动物模型是国内外最常用的非酒精性脂肪性肝炎动物模型，包括高脂饮食脂肪肝动物模型、高糖饮食脂肪肝动物模型和胆碱-蛋氨酸缺乏脂肪肝动物模型。用基因模型和营养模型)，其中蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine-choline-deficient，MCD)饮食诱发的 NASH 模型是国际上被广泛认可的动物模型，操作简便，成模率高，成为研究 NASH 发病机制及防治药物的主要动物模型。

如 CN200710066801.8 公开了一种非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的构建方法。将C57BL/6 小鼠使用胆碱和蛋氨酸缺乏饲料喂养1-8 周并评价相应组别小鼠的成模情况。《蛋 氨酸-胆碱缺乏饮食诱导的非酒精性脂肪性肝炎小鼠模型的建立及动态监测》（世界华人消 化杂志 2011 年 4 月 18 日; 19(11): 1122-1129）研究了蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饮食诱导的 非酒精性脂肪性肝炎(NASH)小鼠肝脏脂肪变性及炎症发生、发展的病理特点。然而，现有技术下已有的MCD 饮食诱导的NASH 动物模型肝纤维化程度较轻，未能体现出进展性肝纤维化或肝硬化的病理进程。由于NASH 伴有肝纤维化、肝硬化是该疾病研究和治疗的核心点，现有 技术下的动物模型不能很好地模拟实际临床中的疾病病理特点，无法满足NASH 研究和治疗的要求。同时，现有技术下MCD 诱导的小鼠模型均出现严重的动物体重下降，在试验周期内体重下降达到或接近 40%，严重违反了实验动物福利原则，动物模型存在很大缺陷。基于生物大分子药物的开发，对于新的非酒精性脂肪性肝炎需求与日俱增，药物研发市场急需能够解决上述模型问题的新的实验动物疾病模型。

发明内容

本发明针对现有技术不足，鉴于以上所述现有模型的缺点，本发明的目的在于提供一种模拟人类NASH 的大鼠模型的构建方法及其用途，并进一步提供由所述的大鼠模型的 构建方法构建获得的大鼠模型及其用途。本发明对成年大鼠给予特定的蛋氨酸、胆碱缺乏的特殊饲料，以及一定剂量的亚硝酸钠诱导动物肝组织脂肪变、炎症病变以及加重肝细胞 凋亡产生NASH 的基本病理过程，特别是出现显著的肝纤维化和早期肝硬化的病理改变。