[发明专利]一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒，该试剂盒包括：已包被抗幽门螺杆菌血清抗体的酶标板，抗幽门螺杆菌卵黄抗体。该试剂盒检测准确、灵敏度高。本发明还公开了一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒的制备方法及其检测方法，该制备方法简单，且制备的试剂盒重复性好，特异性高，操作简便，检测结果准确、快速。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter Pylori，Hp)是一种螺旋形、微厌氧、对生长条件要求十分苛刻的革兰氏阴性杆菌。1983年首次从慢性活动性胃炎患者的胃粘膜活检组织中分离成功，是目前能够在人胃中生存的唯一微生物种类。

幽门螺杆菌是全世界流行范围最广的病原体，大约有50％人感染了幽门螺杆菌，幽门螺杆菌的感染率与地区差异、及其经济条件和生活习惯息息相关：发达国家健康人群幽门螺杆菌的携带率一般在30％左右；发展中国家幽门螺杆菌的携带率一般在50％-70％之间；我国有40％-70％的人群感染幽门螺杆菌。幽门螺杆菌主要引起胃肠道消化系统相关疾病，给人民群众的健康造成了重大威胁，如慢性胃炎、胃溃疡、十二指肠溃疡、胃癌等，因此研究幽门螺杆菌的检测方法具有重要的临床意义。

目前，幽门螺杆菌的检测方法主要有细菌学检测、尿毒酶检测、PCR检测、免疫学检测等。幽门螺杆菌在体外培养条件苛刻，不易培养，而且耗时较长，操作繁琐，费时费力，因此体外培养法在临床上的使用受到一定限制；尿毒酶检测方法操作简单、成本低廉，在临床上有一定使用价值；PCR检测具有灵敏度高、准确度高的特点，但容易污染，成本较高，且对环境和操作人员的要求比较高，临床应用具有局限性；免疫学检测主要通过抗原抗体反应进行检测，可以检测抗体，也可以检测抗原，灵敏度和特异性较高，有广阔的临床应用前景。

综上所述，提供一种快速、高效、准确、灵敏地检测幽门螺杆菌的方法是十分必要的。

发明内容

鉴于上述现有技术存在的缺陷，本发明的目的是提供一种特异性强，灵敏度高，操作简便、检测快速的幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒。

本发明的目的将通过以下技术方案得以实现：

一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒，该试剂盒包括：已包被抗幽门螺杆菌血清抗体的酶标板，抗幽门螺杆菌卵黄抗体。

进一步地，所述酶标板上包被的抗幽门螺杆菌血清抗体为兔抗幽门螺杆菌血清抗体，所述抗幽门螺杆菌卵黄抗体包括抗幽门螺杆菌卵黄抗体的活性片段、抗幽门螺杆菌卵黄抗体的保守性突变体、酶标抗幽门螺杆菌卵黄抗体、酶标抗幽门螺杆菌卵黄抗体的活性片段、酶标抗幽门螺杆菌卵黄抗体的保守性突变体中任一种或其组合。

进一步地，还包括洗涤液、样品稀释液、显色液、终止液。

进一步地，所述酶标的标记酶为辣根过氧化物酶标记、碱性磷酸酶标记、丙酮酸激酶标记、葡萄糖氧化酶标记的任一种，或为荧光标记。

本发明的另外一个目的是提供一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒的制备方法。该制备方法简单，且制备的试剂盒重复性好，特异性高。

一种幽门螺杆菌双抗体夹心法检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：1)采用50mM碳酸盐缓冲液包被抗幽门螺杆菌血清抗体，包被浓度4.8～5.2μg/mL，100-125μL/孔，4℃包被过夜，得包被抗幽门螺杆菌血清抗体的酶标板；

2)甩去包被液，于吸水纸上扣干酶标板，加入封闭液230-280μL/孔，4℃封闭过夜，甩去封闭液，洗涤液洗板扣干，铝箔袋真空包装，得封装好的包被抗幽门螺杆菌血清抗体的酶标板；

3)将抗幽门螺杆菌抗体单独封装，并与封装好的包被抗幽门螺杆菌血清抗体的酶标板一起放置包装盒中，即得。