[发明专利]一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法

权利要求书

1.一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，该分离测定方法包括依序采用微波萃取、高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用的方法对牛肝菌中不同价态汞元素进行分离测定。

2.根据权利要求1所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，该方法微波萃取步骤中使用的萃取液为盐酸HCl。

3.根据权利要求2所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，盐酸萃取液的浓度为0.07mol/L。

4.根据权利要求1所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(Ⅰ)选择仪器及设备；(Ⅱ)配制试剂与标准溶液；(Ⅲ)样品前处理；(Ⅳ)样品测定；具体工艺步骤如下：

(Ⅰ)选择仪器及设备，其中分离测定设备采用高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪HPLC-ICP-MS，仪器及设备按以下最小配置条件备用：

(1)高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用仪，配有规格为150mm×4.6mm×5μm的Agilent Eclipse plus C18分析柱；

(2)超纯水仪；

(3)刀式混合研磨仪；

(4)环形聚焦单模微波萃取仪；

(5)高速冷冻离心机，最大转速14000r/min；

(6)电子天平，精确度0.0001g；

(7)pH计；

(8)0.2μm水相针式滤器；

(9)冰箱；

(Ⅱ)配制试剂与标准溶液：

(1)标准储备液：以甲醇为溶剂，配制二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg标准储备液，每种标准储备液的浓度为3μg/mL，避光保存于4℃冰箱中备用；

(2)系列标准溶液的配制：各吸取三种汞的标准储备液1mL于50mL聚四氟乙烯瓶中，混匀；将经配制得到的混合标准储备液逐级稀释，配制得到不同浓度的二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg系列标准溶液；

(Ⅲ)样品前处理：将经研磨仪磨细的样品，用微波萃取仪萃取、静置、离心、过滤、稀释，得到待测样液；

(Ⅳ)样品分离测定：将处理好的所述待测样液向HPLC-ICP-MS联用仪进样100μL进行测定，对待测样液中的二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg色谱峰进行积分，分别获得各自峰面积，对比各自标准曲线，得到相应的浓度值，最终得到样品中二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg的含量。

5.根据权利要求4所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，步骤(Ⅱ)中：

(1)标准储备液的配制：二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg标准溶液分别用甲醇配成浓度为3μg/mL储备液，避光保存于4℃冰箱中备用；

(2)系列标准溶液的配制：各吸取三种汞的标准储备液1mL于50mL聚四氟乙烯瓶中，混匀；分别吸取三种汞标准使用液0μL、10μL、25μL、50μL、100μL、200μL于1mL色谱瓶中，再分别加入流动相1000μL、990μL、975μL、950μL、900μL、800μL，混匀；得到元素浓度分别为0μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的混合标准溶液；

(3)0.07mol/L的HCl萃取液：吸取6mL盐酸，加入1.2g L-半胱氨酸混合溶解，用超纯水定容至1L；

(4)流动相：A相组成甲醇，B相组成醋酸铵、L-半胱氨酸并用氨水调节pH值为7.5。

6.根据权利要求4所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，步骤(Ⅲ)中：样品前处理：将经研磨仪磨细的样品，称取0.2g于萃取用玻璃管中，放入磁性搅拌子，加入10mL萃取液：0.07mol/L的HCl，用微波萃取仪在55℃，压力150bar，功率110w，保持15min条件下进行萃取；萃取完成后放入冰箱中静置5min，将上清液转移至离心管中，14000rpm/min，4℃，5min条件下离心，吸取上清液经0.2μm水相针式滤器过滤；过滤后吸取500μL样品溶液用流动相1：1稀释；混匀，得到待测样液。

7.根据权利要求4所述的一种针对牛肝菌中不同价态汞元素的分离测定方法，其特征在于，步骤(Ⅳ)中：

样品分离测定及结果计算：将配制的所述二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg系列标准溶液与处理得到的所述待测样液使用HPLC-ICP-MS联用仪进行上机分析：

(1)仪器使用条件：

所述液相色谱仪HPLC条件：A相为甲醇，B相为10mmol/L醋酸铵，含0.12％L-半胱氨酸)并用氨水调节pH至7.5，A+B按照8+92混合等度淋洗；流速为1.0mL/min；进样体积100μL，自动进样；

所述电感耦合等离子体质谱仪ICP-MS条件：RF入射功率1550W，RF匹配电压1.74V；同心圆雾化器，载气为纯度≥99.99％的氩气或氦气，等离子体气体流速15.0L/min，载气流速0.65L/min，辅助气体流速0.45L/min；蠕动泵转速0.1rps；采样深度8mm；检测质量数m/z＝202Hg；停留时间为0.5s，m/z＝202；(2)样品分离测定：

(ⅰ)开机后按所述仪器使用条件进行设置，待稳定后，先使用配制好的系列标准溶液制作标准曲线，以二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg的浓度与相应峰面积分别进行线性回归分析，得到标准曲线，标准曲线线性相关系数R²均大于0.999；

(ⅱ)将处理好的所述待测样液向HPLC-ICP-MS联用仪进样100μL进行测定，对待测样液中的二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg色谱峰进行积分，分别获得各自峰面积，对比各自标准曲线，得到相应的浓度值，最终得到样品中二价汞Hg²⁺、甲基汞MeHg、乙基汞EtHg的含量。