[发明专利]CD3单链抗体-iRGD融合蛋白、制备及其作为抗肿瘤药物的应用有效
| 申请号： | 201710978345.8 | 申请日： | 2017-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN107739410B | 公开（公告）日： | 2021-07-30 |
| 发明（设计）人： | 刘宝瑞 | 申请（专利权）人： | 南京鼓楼医院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C07K1/22;C12N15/70;A61K47/42;A61K39/395;A61P35/00 |
| 代理公司： | 南京钟山专利代理有限公司 32252 | 代理人： | 戴朝荣 |
| 地址： | 210008 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | cd3 抗体 irgd 融合 蛋白 制备 及其 作为 肿瘤 药物 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种CD3单链抗体-iRGD融合蛋白，其特征在于：所述融合蛋白由靶向人CD3单链抗体和肿瘤穿透肽iRGD经由连接肽连接组成，所述融合蛋白具有SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。
2.一种权利要求1所述CD3单链抗体-iRGD融合蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
表达载体pET28a-anti-CD3-iRGD的构建；
将表达载体pET28a-anti-CD3-iRGD转化至表达菌株BL21 DE3；
重组anti-CD3-iRGD的诱导表达及纯化；
对重组anti-CD3-iRGD用1mM 异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导4小时， 收集菌液进行超声破碎，离心后收集沉淀，用8M尿素变性剂溶解沉淀，并依次在6M、4M、2M、0M尿素溶液中透析复性，重组anti-CD3-iRGD经AKTA Purifier 900 FPLC系统，镍离子亲和层析柱纯化；用SDS-PAGE方法检测目的蛋白。
3.权利要求1所述的CD3单链抗体-iRGD融合蛋白在制备抗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述肿瘤包含乳腺癌、胃癌、肝癌、肠癌、胰腺癌、肺癌、宫颈癌。
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