[发明专利]一种稳定的补体C4检测试剂盒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验技术领域，尤其涉及一种稳定的补体C4检测试剂盒的制备方法。

背景技术

补体C4是一种多功能β1-球蛋白，存在于血浆中。C4是补体经典激活途径的一个重要组分，它的测定有助于SLE等自身免疫性疾病诊断，治疗和病因探讨。其中，补体C4降低：见于免疫复合物引起的肾炎、系统性红斑狼疮、病毒性感染、狼疮性症候群、肝硬化、肝炎等；补体C4增高：见于各种传染病、急性炎症、组织损伤、多发性骨髓瘤等。

目前，补体C4的检测方法主要有酶联免疫吸附测定法、放射免疫法、化学发光法和免疫比浊法。其中，酶联免疫吸附测定法精确、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁琐，耗时长，不能适应大规模体检筛查或急诊的需要。放射免疫法灵敏度高，特异性强，但放射免疫反应是竞争性的反应，测得的值是相对量而非绝对量，且存在辐射和放射性污染。化学发光法精确度高，检测速度快，但成本高昂，对配套设施要求高，无法应用于广大中、基层的医院和医疗卫生机构。所谓免疫比浊法，是利用抗原抗体反应原理，样品中的补体C4与反应液中抗补体C4的抗体，在一个最佳反应条件下，形成抗原－抗体聚合物，使反应液产生浊度变化，产生的浊度与样品中的补体C4含量呈正比，通过测定吸光度变化，与补体C4标准曲线比较，得出补体C4含量；但是由于补体C4临床临界值很低，当样品中补体C4的含量处于正常生理范围时，即抗原浓度很低时，产生抗原-抗体聚合物的量少，反应液浊度变化极小，吸光度变化就不能被检出，就是说此方法灵敏度不够。

胶乳增强免疫透射比浊法就是提高免疫透射比浊法的灵敏度，人血清中补体C4与相应抗体在溶液相遇，立即形成抗原--抗体复合物，形成一定浊度；该浊度高低在一定量抗体存在时与抗原的含量成正比，在340nm波长下测定浊度进行补体的定量测定；该方法具有操作简便快速、自动化、定量准确、敏感度高等优点，可满足门、急诊和大规模体检筛查等需要。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种操作简便快速、自动化、定量准确、敏感度高的稳定的补体C4检测试剂盒的制备方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：一种稳定的补体C4检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)按照下列组分含量配制试剂R1：

试剂R1：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R1的组分含量，将磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾、氯化钠溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R1缓冲液；

②按照上述试剂R1的组分含量，将聚乙二醇6000、叠氮钠、Tween-20溶于R1缓冲液中，搅拌均匀，待所有原料充分溶解，即制得试剂R1；

(2)按照下列组分含量配制试剂R2：

试剂R2：

其溶剂为纯化水；

①按照上述试剂R2的组分含量，将磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钾、氯化钠溶于纯化水中，搅拌均匀，待充分溶解，配制成R2缓冲液；

②按照上述试剂R2的组分含量，将Tween-20、聚氧乙烯聚丙乙烯共聚物、叠氮钠溶于R2缓冲液中，搅拌均匀，即得分散液；

③制备胶乳包被的羊抗人C4特异抗体颗粒：

a.将胶乳颗粒用PB缓冲液稀释到浓度为1％-5％，每毫升体积溶液中加入EDAC 1.6mg，室温反应2h，10000-20000rpm转速下离心30-40min，去上清，将沉淀悬浮于MES缓冲液中，超声分散；

b.再于10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，将沉淀悬浮于PB缓冲液中，使其中的胶乳颗粒最终浓度为3.0％，超声分散；接着，边搅拌边加入等体积的含羊抗人C4特异抗体的PB稀释液，混合搅拌，室温反应2h，其中的胶乳颗粒最终浓度为1.5％；

c.10000-20000rpm转速下离心30-40min，弃上清，沉淀悬浮MES缓冲液中，超声分散，加入BSA，4℃封闭过夜，离心去上清后，得最终所需的胶乳包被的羊抗人C4特异抗体颗粒；

④用分散液来溶解得到的胶乳包被的羊抗人C4特异抗体颗粒，使其中的胶乳颗粒终浓度为0.1-2.0％，超声分散，最终制得试剂R2。

作为本发明的优选方式之一，所述制备胶乳包被的羊抗人C4特异抗体颗粒的过程的步骤a中，采用的胶乳颗粒原料为粒径为50-80nm的胶乳颗粒。