[发明专利]一种快速测定IL‑6/IL‑6受体抗体药物生物学活性的方法

权利要求书

1.一种快速测定IL-6/IL-6R抗体药物生物学活性的方法，所述方法包括构建得到稳定表达SIE报告基因的效应细胞，用IL-6刺激激活报告基因表达，并用IL-6/IL-6R抗体药物阻断IL-6信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。

2.一种快速测定IL-6/IL-6R抗体药物生物学活性的方法，所述方法包括：

(1)构建得到稳定表达SIE报告基因的效应细胞；

(2)将IL-6加至(1)所述细胞中刺激激活报告基因表达；

(3)将IL-6/IL-6R抗体药物样品及参比品等比例稀释，将稀释后的抗体分别转移至步骤(2)中的细胞和IL-6混合物中，在37℃培养箱中进行孵育；

(4)加入荧光素酶底物，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中稳定表达SIE报告基因的效应细胞选自DS-1细胞、MH60.BSF2细胞、B9细胞293细胞、CHO细胞、NSO细胞、SP2细胞、HeLa细胞、BHK细胞、COS细胞、人肝癌细胞、549A细胞、3T3细胞中的任一种，优选为稳定表达SIE报告基因的DS-1细胞。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其中报告基因为luciferase荧光素酶报告基因。

5.根据权利要求1或2所述的方法，其中IL-6/IL-6R抗体药物为托珠单抗、Sarilumab、Siltuximab、杰瑞单抗、药明康德的WBP216、迈博太科的CMAB806、海正药业批件号为2016L09574的单克隆抗体等上市及在研的针对IL-6或IL-6受体的抗体药物。

6.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述步骤(1)包括：用包含SIE序列的报告基因载体转染DS-1细胞、MH60.BSF2细胞、B9细胞293细胞、CHO细胞、NSO细胞、SP2细胞、HeLa细胞、BHK细胞、COS细胞、人肝癌细胞、549A细胞或3T3细胞，并加入相应抗生素筛选得到稳定表达报告基因的单克隆细胞株。

7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：制备效应细胞悬液，按照2.5×10⁴-2×10⁵个/孔，优选5×10⁴个/孔的细胞密度。

8.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：加入IL-6激活报告基因表达，IL-6浓度为10pg/mL-2μg/mL，优选IL-6浓度为100ng/mL。

9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：托珠单抗稀释起始浓度为1pg/mL-1mg/mL，优选为125μg/mL。

10.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：托珠单抗等比例稀释的比例为1:2-1:5，优选为1:3。

11.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：培养时间为4-22小时，优选为6小时。

12.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：使用荧光素酶试剂盒检测化学发光值，优选为，使用promega公司的Bio-Glo荧光素酶试剂盒、Biovision公司的Luciferase荧光素酶报告基因检测试剂盒、碧云天公司的荧光素酶报告基因检测试剂盒检测化学发光值。

13.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：在酶标仪上使用化学发光读取相对化学发光单位值，通过数据处理拟合倒S型四参数曲线。

14.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：通过比较样品与参比品四参数曲线的半抑制浓度值，得出样品的相对效价。

15.权利要求1-14所述方法在IL-6/IL-6R抗体药物的质量控制中的应用。