[发明专利]一株高产内切β-1,4-葡聚糖酶的绿色木霉及其应用

权利要求书

1.一株高产内切β-1,4-葡聚糖酶的绿色木霉菌株，其特征在于，所述绿色木霉菌株具体为绿色木霉(Trichoderma viride)GG-242，保藏编号为CGMCC No.14135。

2.权利要求1所述绿色木霉所产的β-1,4-葡聚糖酶，其特征在于，发酵生产方法如下：

将种子液按照接种量5-10％的比例接入发酵罐，培养条件为初始pH 4.5-5.5、34-36℃、风量0-24h 0.25-0.3vvm、24-48h 0.5-0.8vvm、48h-放罐0.9-1.0vvm、转速200-800rpm，发酵期间pH低于4.5时，通过补料控制pH4.5-5.5，至酶活增长缓慢，菌体自溶严重时结束发酵，发酵周期为140-150h；

发酵完成后，内切β-1,4-葡聚糖酶的提取与精制方法如下：

向发酵液中加入3-5％珍珠岩助滤剂，进行板框压滤；将压滤液中加入1-2％硅藻土助滤剂进行精滤；用20000分子量的超滤膜对精滤液进行超滤浓缩；在浓缩液中加入稳定剂、防腐剂，然后用无菌膜进行过滤除菌，即得到内切β-1,4-葡聚糖酶成品酶制剂。

3.如权利要求2所述的β-1,4-葡聚糖酶，其特征在于，

种子液培养方法如下：将摇瓶培养的种子液按照接种量1.5％的比例接入种子罐培养基，在初始pH4.5-5.5、34-36℃、转速200-800rpm条件下培养48-50h；

摇瓶培养方法如下：将斜面培养得到的菌株取一接种环菌苔接入摇瓶种子培养基中，在初始pH4.5-5.5、34-36℃、摇床转速200-250rpm条件下培养72-80h；

斜面培养方法如下：将所述木霉突变株取一接种环菌苔接种于CMA平板，34-36℃下恒温培养72h。

4.如权利要求3所述的β-1,4-葡聚糖酶，其特征在于，所述稳定剂为2％氯化钠、所述防腐剂为3‰苯甲酸钠和1.5‰山梨酸钾。

5.权利要求1所述高产内切β-1,4-葡聚糖酶的绿色木霉菌株在生产β-1,4-葡聚糖酶的应用。

6.权利要求2所述内切β-1,4-葡聚糖酶在降解纤维素中的应用。