[发明专利]通用型嵌合抗原受体T细胞制备技术

说明书

本发明涉及一种通用型嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。具体地，本发明提供了一种CAR‑T细胞，所述的表达嵌合抗原受体CAR，并且所述细胞HLA‑A/HLA‑B与TCR的结合是被抑制的，所述细胞中的TCR基因表达是被沉默的。本发明的通用型CAR‑T细胞可以用于异体肿瘤治疗，且异体输注时不会引起GVHD及HVG反应，改善了异体CAR‑T细胞在受体体内的存活及抗肿瘤效果。

技术领域

本发明涉及免疫细胞治疗领域，更具体地涉及一种通用型嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的肿瘤治疗模式，是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法。它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，来激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。

嵌合免疫抗原受体(Chimeric antigen receptors，CARs)由胞外抗原识别区域，通常是scFv(single-chain variable fragment)，跨膜区以及胞内共刺激信号区域组成。CARs的胞外段可识别一个特异的抗原，随后通过胞内结构域转导该信号，引起T细胞的活化增殖、细胞溶解毒性和分泌细胞因子，进而清除靶细胞。

CAR-T细胞在血液系统恶性肿瘤的治疗中显示出前所未有的疗效，如对晚期复发难治性急性淋巴细胞白血病(ALL)治疗的完全缓解(CR)可达到90％，对慢性淋巴细白血病(CLL)和部分B细胞淋巴瘤的CR达到50％以上。此外，CAR-T细胞在治疗实体瘤方面也表现出很大的潜力。

在传统的CART细胞治疗中，首先分离病人自体T细胞(或者异源供体)，激活并进行基因改造产生CAR-T细胞，随后注入同一病人体内。这种方式患移植物抗宿主病概率极低，抗原被T细胞以非MHC限制方式识别。但这种治疗方式严重受制于患者的个体状况，分离改造细胞所造成的时间和金钱成本也非常高。因此，本领域仍然需要进一步的研究，开发一种可以大规模制备，质量均一稳定，随时可调用给任何患者的通用型CAR-T细胞。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通用型嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

在本发明的第一方面，提供了一种通用型嵌合抗原受体T细胞(CAR-T细胞)，所述CAR-T细胞具有以下特征：

(a)所述CAR-T细胞表达嵌合抗原受体CAR，所述CAR靶向肿瘤细胞的标志物；和

(b)所述CAR-T细胞HLA-A和/或HLA-B与TCR(T cell receptor)的结合是被抑制的。

在另一优选例中，所述“HLA-A和/或HLA-B与TCR的结合是被抑制的”指HLA-A与TCR不结合或基本不结合，和/或HLA-B与TCR不结合或基本不结合。

在另一优选例中，所述“HLA-A与TCR基本不结合”指所述CAR-T细胞HLA-A与TCR的结合量A1与正常T细胞HLA-A与TCR的结合量A0的比值，即A1/A0≤0.05，较佳地A1/A0≤0.03，更佳地≤0.02，更佳地≤0.01，最佳地为0。

在另一优选例中，所述“HLA-B与TCR基本不结合”指所述CAR-T细胞HLA-B与TCR的结合量B1与正常T细胞HLA-B与TCR分子的结合量B0的比值，即B1/B0≤0.05，较佳地B1/B0≤0.03，更佳地≤0.02，更佳地≤0.01，最佳地为0。

在另一优选例中，所述的TCR来源于受体T细胞。

在另一优选例中，所述CAR-T细胞的HLA-I的基因表达是被沉默的，从而使得HLA-A和/或HLA-B与TCR(T cell receptor)的结合被抑制。