[发明专利]检测中药材肉苁蓉的LAMP引物组合物、试剂盒、方法和用途有效
| 申请号： | 201710795478.1 | 申请日： | 2017-09-06 |
| 公开（公告）号： | CN108330165B | 公开（公告）日： | 2021-10-01 |
| 发明（设计）人： | 黄耀江;刘宇;蒋丹;马敏敏 | 申请（专利权）人： | 中央民族大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京三聚阳光知识产权代理有限公司 11250 | 代理人： | 李敏 |
| 地址： | 100081 北*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 中药材 肉苁蓉 lamp 引物 组合 试剂盒 方法 用途 | ||
1.一种检测中药材肉苁蓉的LAMP引物组合物，其特征在于，所述LAMP引物组合物包括：正向内引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO : 1所示；反向内引物BIP，其核苷酸序列如SEQID NO : 2所示；正向外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO :3所示；和反向外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 :4所示；以及环引物LB，其核苷酸序列如SEQ ID N0 :6所示。
2.一种检测中药材肉苁蓉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述LAMP引物组合物。
3.根据权利要求2所述的检测中药材肉苁蓉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括Bst DNA聚合酶、含dNTPs的反应缓冲液和去离子水。
4.根据权利要求2或3所述的检测中药材肉苁蓉的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：
正向内引物FIP，40 pmol/μL，100μL；
反向内引物BIP，40 pmol/μL，100μL；
正向外引物F3，5 pmol/μL，100μL；
反向外引物B3，5pmol/ μL，100μL；
环引物LB，20pmol/ μL，100μL；
Bst DNA聚合酶，8U/μL，100μL；
含dNTPs的反应缓冲液，1.5mL；
去离子水1mL。
5.一种检测中药材肉苁蓉的方法，其特征在于，包括如下步骤:
（1）提取待测中药材肉苁蓉的DNA；
（2）以步骤（1）提取到的DNA为模板，采用权利要求1所述的检测中药材肉苁蓉的LAMP引物组合物进行LAMP扩增反应；
（3）检测步骤（2）中的扩增反应液中是否存在扩增产物，若存在扩增产物，则所述待测中药材肉苁蓉为真；若不存在扩增产物，则所述待测中药材肉苁蓉为假。
6.根据权利要求5所述的检测中药材肉苁蓉的方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应的体系为：
模板DNA，0.83×101ng/μL-0.83×10-5ng/μL，2μL；
引物FIP，40pmol/μL，4μL；
引物BIP，40pmol/μL，4μL；
引物F3，5pmol/μL，0.5μL；
引物B3，5pmol/μL，0.5μL；
引物LB，20pmol/μL，2μL；
含dNTPs的反应缓冲液，11μL；
Bst DNA聚合酶，8U/μL，1μL。
7.根据权利要求5或6所述的检测中药材肉苁蓉的方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应程序为：反应温度为60℃-65℃，反应时间为20min-120min。
8.根据权利要求7所述的检测中药材肉苁蓉的方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应程序为：反应温度为65℃，反应时间为90min。
9.权利要求1所述的用于检测中药材肉苁蓉的LAMP引物组合物或权利要求2-4任一项所述的用于检测中药材肉苁蓉的试剂盒在检测中药材肉苁蓉中的用途。
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