[发明专利]一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法。

背景技术

CIK免疫细胞，即细胞因子诱导的杀伤细胞(Cytokine-InducedKiller，CIK)，细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。由于该细胞同时表达CD3和CD56两种膜蛋白分子，故又称为NK细胞(自然杀伤细胞)样T淋巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗瘤活性，和NK细胞的非MHC限制性杀瘤优点。该细胞对肿瘤细胞的识别能力很强，如同“细胞导弹”，能精确“点射”肿瘤细胞，但不会伤及“无辜”的正常细胞。尤其对手术后或放化疗后患者效果显著，能消除残留微小的转移病灶，防止癌细胞扩散和复发，提高机体免疫力，因此，CIK细胞被认为是新一代的肿瘤过继细胞免疫治疗的首选方案。CIK免疫细胞扩增能力限制了其在临床上进一步的推广应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，以提高cik免疫细胞的扩增速度。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，包括以下步骤：

(1)将纯化的CD3单克隆抗体溶液室温下包被细胞培养板，并于4℃存储备用；

(2)将分离得到的单个核细胞以基础培养基培养，接种于细胞培养板中，通过γ-干扰素溶液刺激细胞24h，之后经离心、换液，转移至步骤(1)得到的CD3单克隆抗体包被的细胞培养板中培养，每隔2-3d换培养液，并每隔5-10天悬浮刺激细胞，培养至20-25d时，结束培养。

所述步骤(1)中，包被的细胞培养板在使用之前，需吸出孔内的CD3单克隆抗体溶液，并用D-Hanks缓冲液冲洗细胞培养板。

所述步骤(2)中，基础培养基为PRMI-1640培养基。

所述步骤(2)中，培养液中含有白细胞介素-1、白细胞介素-2。

所述步骤(2)中，白细胞介素-1、白细胞介素-2的浓度分别为50-200U/mL，100-200U/mL。

所述步骤(2)中，保持细胞密度为0.8-1.2*10⁶个/mL。

所述步骤(2)中，γ-干扰素溶液的浓度为500-1000U/mL。

有益效果：本发明的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，减少了cik免疫细胞的培养时间及培养成本，能够提高cik免疫细胞的扩增速度。

具体实施方式

根据下述实施例，可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，包括以下步骤：

(1)将纯化的CD3单克隆抗体溶液室温下包被细胞培养板，并于4℃存储备用；包被的细胞培养板在使用之前，需吸出孔内的CD3单克隆抗体溶液，并用D-Hanks缓冲液冲洗细胞培养板；

(2)将分离得到的单个核细胞以基础培养基PRMI-1640培养，接种于细胞培养板中，通过浓度为1000U/mL的γ-干扰素溶液刺激细胞24h，之后经离心、换液，转移至步骤(1)得到的CD3单克隆抗体包被的细胞培养板中培养，每隔2d换培养液，培养液中白细胞介素-1、白细胞介素-2的浓度分别为50U/mL，200U/mL。并每隔5天悬浮刺激细胞，培养至20d时，培养过程中保持细胞密度为1.2*10⁶个/mL，结束培养。

实施例2

一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，包括以下步骤：

(1)将纯化的CD3单克隆抗体溶液室温下包被细胞培养板，并于4℃存储备用；包被的细胞培养板在使用之前，需吸出孔内的CD3单克隆抗体溶液，并用D-Hanks缓冲液冲洗细胞培养板；

(2)将分离得到的单个核细胞以基础培养基PRMI-1640培养，接种于细胞培养板中，通过浓度为500U/mL的γ-干扰素溶液刺激细胞24h，之后经离心、换液，转移至步骤(1)得到的CD3单克隆抗体包被的细胞培养板中培养，每隔3d换培养液，培养液中白细胞介素-1、白细胞介素-2的浓度分别为100U/mL，150U/mL。并每隔10天悬浮刺激细胞，培养至25d时，培养过程中保持细胞密度为0.8*10⁶个/mL，结束培养。

实施例3

一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，包括以下步骤：