[发明专利]一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法在审
| 申请号： | 201710739714.8 | 申请日： | 2017-08-25 |
| 公开（公告）号： | CN107418933A | 公开（公告）日： | 2017-12-01 |
| 发明（设计）人： | 朱学义;徐峰波;陈乐;王豪东;陈艳普;王秋文 | 申请（专利权）人： | 河南省银丰生物工程技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/0783 | 分类号： | C12N5/0783 |
| 代理公司： | 南京源古知识产权代理事务所(普通合伙)32300 | 代理人： | 马晓辉 |
| 地址： | 450000 河南省郑*** | 国省代码： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 cik 免疫 细胞 体外 诱导 扩增 方法 | ||
1.一种cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将纯化的CD3单克隆抗体溶液室温下包被细胞培养板，并于4℃存储备用；
(2)将分离得到的单个核细胞以基础培养基培养，接种于细胞培养板中，通过γ-干扰素溶液刺激细胞24h，之后经离心、换液，转移至步骤(1)得到的CD3单克隆抗体包被的细胞培养板中培养，每隔2-3d换培养液，并每隔5-10天悬浮刺激细胞，培养至20-25d时，结束培养。
2.根据权利要求1所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(1)中，包被的细胞培养板在使用之前，需吸出孔内的CD3单克隆抗体溶液，并用D-Hanks缓冲液冲洗细胞培养板。
3.根据权利要求1所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(2)中，基础培养基为PRMI-1640培养基。
4.根据权利要求1所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(2)中，培养液中含有白细胞介素-1、白细胞介素-2。
5.根据权利要求4所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(2)中，白细胞介素-1、白细胞介素-2的浓度分别为50-200U/mL，100-200U/mL。
6.根据权利要求1所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(2)中，保持细胞密度为0.8-1.2*106个/mL。
7.根据权利要求1所述的cik免疫细胞的体外诱导扩增方法，其特征在于：所述步骤(2)中，γ-干扰素溶液的浓度为500-1000U/mL。
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