[发明专利]一种细胞外囊泡中RNA的提取方法

权利要求书

1.一种细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：所述提取方法包括以下步骤：

S1：分离纯化生物样品中的细胞外囊泡，裂解该分离纯化的细胞外囊泡；

S2：加入有机溶剂使步骤S1中的RNA进入水相；

S3：将醇类有机溶剂加入到步骤S2得到的含有RNA的水相中，混匀；

S4：步骤S3中的溶液混匀后，立刻加入含有阳离子的试剂，轻轻混匀，则该阳离子的试剂与带负电的RNA结合；

S5：加入惰性共沉淀溶液到步骤S4中得到的溶液中；

S6：离心步骤S5中得到的溶液，得到RNA沉淀；

S7：洗涤步骤S6中得到的沉淀，再重新溶解沉淀即为细胞外囊泡RNA溶液。

2.根据权利要求1所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S1中，所述的细胞外囊泡包括外泌体、微囊泡、凋亡小体和菌体外膜泡中的至少一种。步骤S1中，所述生物样品包括但不仅限于细胞培养上清、组织块、组织液、组织间液、组织浸出液、血清、血浆、全血、细胞间液、淋巴液、脑脊液、房水、胸水、腹水、滑液、胃肠道分泌液、消化腺分泌液、尿液、唾液、痰液、泪液、乳汁、精液、肺盥洗液、阴道分泌液、阴道盥洗液、输卵管盥洗液、卵泡液、羊水、粪便浸出液、菌体培养上清等中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S1中，使用RNA提取试剂裂解该分离纯化的细胞外囊泡，所述RNA提取试剂包括含有苯酚和/或β-巯基乙醇的试剂；

步骤S2中，所述有机溶剂为氯仿；

步骤S3中，所述醇类有机溶剂包括但不仅限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、异戊醇中的至少一种；

步骤S7中，使用醇溶液进行洗涤，所述醇溶液包括但不仅限于甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇、丙三醇、异戊醇中的至少一种。

4.根据权利要求3所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S4中，加入所述含有阳离子的试剂在溶液中的终浓度为0.01M～3M。

5.根据权利要求4所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：所述的含有阳离子的试剂包括含有一价阳离子的试剂和/或含有二价阳离子的试剂。

6.根据权利要求5所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：所述的含有阳离子的试剂包括但不仅限于醋酸钠、氯化钠、硝酸钠、磷酸钠、硫酸钠、醋酸钾、氯化钾、硝酸钾、磷酸钾、硫酸钾、醋酸镁、氯化镁、硝酸镁、磷酸镁、硫酸镁中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：所述惰性共沉淀溶液中的惰性共沉淀试剂成分包括但不仅限于糖原、核酸、核糖核苷酸、脱氧核酸、脱氧核糖核苷酸、海藻糖、线性聚丙烯酰胺、线形核酸、环形核酸和核苷酸中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S6中，高速离心步骤S5中得到的溶液，离心加速度为5000g～15000g，持续时间1-60分钟。

9.根据权利要求8所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S4中，当步骤S3中的溶液混匀后，在室温下立刻加入含有阳离子的试剂，轻轻的混匀；

步骤S5中，当步骤S4中混匀后，在室温下立刻加入惰性共沉淀溶液，轻轻混匀；在温度-80℃～室温下静置1min～16h。

10.根据权利要求9所述的细胞外囊泡中RNA的提取方法，其特征在于：步骤S5中所加入的惰性共沉淀溶液的浓度为0.001μg/mL～100mg/mL。