[发明专利]一种血清IgG的Gal指标在结核病诊断中的应用

说明书

技术领域

本发明属于结核病的诊断领域，具体涉及一种通过测定血清样品中免疫球蛋白G(IgG))N糖链末端半乳糖对结核病人进行血清学诊断的诊断工具及其辅助诊断以提高检出率，特别是显著提高菌阴结核病人诊断检出率中的应用。

背景技术

结核病是一种严重危害人类和动物健康的慢性传染病，结核分枝杆菌所致结核病是人畜共患的结核病。全球目前有近三分之一的人感染结核分枝杆菌，据WHO《2016全球结核报告》估计2015年新发结核病例1040万例，其中仅有约610万人被检测发现，因结核病死亡人数达140万，超过其它传染病死亡人数的总和。

早期以及明确的诊断对结核治疗、预后以及传播的控制有着极其重要的意义。目前临床上应用的结核病诊断技术主要有结核菌素(PPD)试验、痰细菌培养、抗酸染色、血清学抗体检测、PCR、IFN-的ELISpot检测及基因芯片等方法，在临床应用中均存在或多或少的局限性，如，PPD试验的假阳性率高；PCR无法区分菌体的活动状态；而ELISpot及基因芯片操作繁琐成本较高，样本收集需要新鲜全血细胞，较困难；抗体的检测不能区分窗口期感染、现行感染与既往感染；痰培养的方法周期长、易污染；抗酸染色的方法灵敏度低，检出率低。因此，亟待开发新型的、有效的结核诊断试剂及结核病药物制剂对结核病的防治具有重要意义。肺结核诊断的金标准是痰涂片和(或)培养结核菌阳性，但痰涂片检出率或敏感性仅为30-60％，因此痰涂片和(或)培养阴性的菌阴结核病是实验室最为常见的难以诊断的结核病(陆再英，钟南山。内科学。第7版。北京：人民卫生出版社，2008：49)。目前菌阴结核病诊断没有相应的诊断分子标识，大多数菌阴结核诊断仅仅依据临床症状，结合影像学检测、T-SPOT等检测结果确诊，因此菌阴结核严重缺乏有效的实验室诊断手段(Siddiqi K,Lambert ML,Walley J.Clinical diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis in low-income countries:the current evidence.Lancet Infect Dis.2003 May；3(5):288-96)。

发明内容

本发明的目的在于提出血清IgG表面双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化程度(具体为N糖链末端去半乳糖(Gal₀)与半乳糖糖链(Gal₁和Gal ₂)丰度的比值，IgG Gal-ratio)可作为结核病的诊断标志，并具体提出用于特异性检测该标志物的试剂在制备用于结核病的诊断的诊断工具中的应用；本发明所提出的结核病的诊断标志的水平与结核病的发生密切相关，可用于结核病的诊断，进而用于指导结核病的治疗。

为了实现上述目的本发明采用的技术方案是：

在本发明的第一方面中，提供了一种特异性检测血清IgG双天线复杂型N糖链的末端半乳糖基化程度的试剂在制备用于结核病，特别是用于菌阴结核病的辅助诊断工具中的应用。

作为优选，通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱检测血清IgG N-糖链双天线末端无半乳糖的质谱峰峰高Gal₀、末端连有1个半乳糖的质谱峰峰高Gal₁和末端连有2个半乳糖的质谱峰峰高Gal₂；

通过以下公式，获得Gal-ratio：

Gal-ratio＝Gal₀/(Gal₁+Gal₂×2)，

每个血清样本平行质谱检测3次，取3次质谱峰高均值，代入上述Gal-ratio计算公式中，最终得到Gal-ratio值，将其与相同检测条件下的正常个体的血清IgG的Gal-ratio相比的增高，诊断为患有疑似结核病。

作为优选，所述结核病为结核分枝杆菌或耐药结核分枝杆菌导致的结核病，包括所有人畜共患的结核病。

作为优选，(i)用于结核病诊断：当Gal-ratio值达到或高于0.3668，则提示对象患结核病；

(ii)用于痰涂片阴性结核(AFS^-)人群诊断：当Gal-ratio值达到或高于0.3668，则提示对象患结核病；

(iii)用于痰涂片阳性结核(AFS⁺)人群诊断：当Gal-ratio值达到或高于0.4582，则提示对象患结核病；