[发明专利]一种新城疫病毒抗体快速定量检测试剂盒及其应用

说明书

本发明属于动物传染病检测技术领域，具体涉及一种新城疫病毒抗体快速定量检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒可对新城疫病毒抗体进行实时、快速动态定量检测，对鸡群健康水平、免疫后的抗体水平监测具有重要意义。该试剂盒由试纸条与测试卡壳和样品稀释液组成，所述的试纸条由样品垫、吸收垫、涂覆有由保藏号为CCTCC M 2017427的大肠杆菌BL21/pSmart‑HN表达的HN蛋白‑胶体金标记物和兔IgG－胶体金标记物的结合垫，包被有新城疫抗原蛋白HN的第一检测线和第二检测线，包被有羊抗兔IgG的质控线的硝酸纤维素膜，依次按吸收垫、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫的顺序粘贴在不吸水的支撑薄片上构成试纸条。

技术领域

本发明属于动物免疫应用技术领域。具体涉及一种新城疫病毒抗体快速定量检测试剂盒及其应用。本发明的试剂盒可对新城疫病毒抗体进行实时、快速的动态定量检测，对鸡群健康水平、免疫后的抗体水平监测具有重要意义。

背景技术

新城疫(Newcastle disease,ND)感染是目前危害我国养禽业的几种主要呼吸道疾病之一，可导致禽不同程度的死亡和生产性能的下降，给我国养禽业造成极大的经济损失。

由于我国地域广阔，养殖模式多样，在家禽养殖中，各种疾病特别是呼吸道疾病仍时有发生，其中新城疫是非常常见且易发的禽呼吸道疾病。为了避免家禽疾病的发生，疫苗免疫是有效的预防手段，但是免疫后的家禽群体的抗体监测更是不可或缺的，是评价免疫效果，掌握疫情动态最直接、最有效的方法，因此，免疫后的抗体水平监测已成为各地养禽场和诊断室的常规监测项目。

现在家禽抗体检测的方法众多，除传统的沉淀反应、凝集实验、补体结合实验外，标记免疫测定技术如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等已成为主要的免疫测定技术，免疫印迹法也发挥了明显的作用，一些快速检测方法如快速斑点免疫结合实验也被广泛使用不同的检测方法，但是其灵敏度、准确性、重复性并不完全相同，加上试剂盒质量不一，都影响到实验结果。在应用或建立一个方法时，检测系统中所有成分的浓度必须经过严格的滴定，选择最恰当的浓度范围。但这些方法对操作人员、设备等有较高的要求。而且上述方法大多耗时较长(如血凝抑制试验需1～2小时；ELISA试验需2～3小时等)，不便于实时、快速诊断，所以均无法在基层大范围地推广使用。

胶体金免疫层析(Gold-immunochromatography assay GICA)是以胶体金作为示踪物，基于胶体金标记技术应用于抗原抗体反应的一种免疫标记技术。其核心技术是以硝酸纤维素膜为固相载体，因毛细管作用而促使样品溶液在层析条上泳动，并使样品中的待检物与层析膜上针对待检物的受体(如抗原或抗体)在短时间内发生高特异性、高亲和性的免疫反应。它具有简便，快速，特异性强，灵敏度高，费用低的优点。

基于该技术，国内外在人医疾病监测，环境危害监控，食品安全保障及畜禽疾病检测等领域，都已经研制出了多种胶体金免疫层析快速检测测试卡。在鸡疫病诊断和检测方面，鸡新城疫、鸡传染性支气管炎、鸡传染性法氏囊及鸡毒霉形体抗体免疫胶体金快速检测试剂盒获得相关专利(专利号：200710169103.0；200710169105.X；200710169104.5；200710169106.4)。

但是上述试剂盒是仅对相关疾病或疫苗免疫后抗体水平的进行定性或者半定量检测，不能定量地监测鸡群抗体水平。定量检测鸡群的免疫水平和评价鸡群的免疫状况对于疾病的控制有着重要的意义。

本发明将新城疫病毒蛋白(NDV-HN)作为检测线上的捕获试剂，研制出新城疫病毒抗体免疫胶体金快速检测试纸条，并与胶体金生物传感检测仪有机整合，建立一种新城疫病毒抗体快速定量检测试剂盒。提供一种监测鸡群NDV抗体水平及评估该疾病免疫效果的快速、易用的抗体定量检测方法。

本发明制备的试剂盒通过双检测线和质控线的信号比值与被检测血清效价(即抗体含量)所呈现的对应关系，实现了实时、定量检测待测血清的效价。为防控新城疫的发生提供一种科学有效的技术支撑，同时也为其他疾病抗体的快速、定量监测提供了一种参考依据。