[发明专利]一种测定糖化血红蛋白含量中化学发光板的包被方法

说明书

技术领域

本发明涉及糖化血红蛋白含量检测技术领域，尤其是一种测定糖化血红蛋白含量中化学发光板的包被方法。

背景技术

化学发光免疫分析是灵敏度较高的一种检测技术，其具有标记物稳定性好，无污染，操作简单等优点，该方法能够很好的弥补上述其他方法的不足。包被抗体的化学发光板是化学发光免疫分析检测试剂盒中重要的一部分，它是检测糖化血红蛋白含量的基体，对于该发光板包被的处理能够反应该检测试剂盒的性能指标。该检测试剂盒的性能指标的准确度和灵敏度等性能的好坏，对于血清中糖化血红蛋白含量的测定发挥重要的作用，能为临床诊断、监测治疗提供科学依据。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种测定糖化血红蛋白含量中化学发光板的包被方法，该化学发光板的包被方法能够准确地对血清中糖化血红蛋白的含量进行定量定性分析，该化学发光板的包被方法能够提升检测试剂盒的性能指标，使其具有较高的灵敏度，较宽的线性范围等特点。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：一种测定糖化血红蛋白含量中化学发光板的包被方法，其特征在于，包括以下步骤：①制备包被过程中的使用液，该使用液包括包被液、清洗液、复合酶液、偶联液、保护液，②选取材质为96孔白色不透明的聚苯乙烯微孔板，③聚苯乙烯微孔板的每孔加入50微升的偶联液，室温条件下孵育30min，用清洗液清洗聚苯乙烯微孔板3次，每次5min；④聚苯乙烯微孔板的每孔再加入100微升的包被液，偶联过程中温度条件为室温，时间为1h，用清洗液清洗聚苯乙烯微孔板3次，每次5min；⑤再在聚苯乙烯微孔板的每孔加入50微升的保护液，低温，风干，

所述包被液由40mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、4.5ug/mL的糖化血红蛋白抗体、质量分数为0.05％的Brij-35、质量分数为1.5％的蔗糖、质量分数为0.05％的PC-300组成，

所述4.5ug/mL的糖化血红蛋白抗体制备过程如下：选取糖化血红蛋白抗体，加入50微升复合酶液，酶切过程中温度条件为37℃，时间为1.5h，

所述清洗液由40mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的Tween-80组成，

所述复合酶液是由胃蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比例为1:1，

所述偶联液采用1.5mM的N,N’-羰基二咪唑的醇溶液，

所述保护液采用质量分数为50％的甘油-磷酸盐缓冲液。

采用上述方案，本发明的发光板的包被方法对于某些干扰物有较好的抵抗能力，如类风湿因子等，其灵敏度高、简便快速、抗干扰能力强，在糖化血红蛋白含量的测定中发挥重要作用，能够为临床诊断、监测治疗提供科学依据。

下面结合附图对本发明作进一步描述。

附图说明

附图1为本发明具体实施例6试剂方法与参考方法检测结果相关分析图，采用化学发光仪，对40个血清样本进行测定，并对其进行相关分析。其中相关系数：r²＝0.996，线性方程为：y＝1.008x-0.004。

具体实施方式

本发明的保护范围不局限于下述具体实施方式，本领域一般技术人员根据本发明公开的内容，可以采用其他多种具体实施方式实施本发明的，或者凡是采用本发明的设计结构和思路，做简单变化或更改的，都落入本发明的保护范围。本发明的具体实施例所采用的测定糖化血红蛋白含量中化学发光板的包被方法，其包括以下步骤：①制备包被过程中的使用液，该使用液包括包被液、清洗液、复合酶液、偶联液、保护液，

包被液由40mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、4.5ug/mL的糖化血红蛋白抗体、质量分数为0.05％的Brij-35、质量分数为1.5％的蔗糖、质量分数为0.05％的PC-300组成，

4.5ug/mL的糖化血红蛋白抗体制备过程如下：选取糖化血红蛋白抗体，加入50微升复合酶液，酶切过程中温度条件为37℃，时间为1.5h，

清洗液由40mM的pH＝7.4的磷酸盐缓冲液、质量分数为0.05％的Tween-80组成，

复合酶液是由胃蛋白酶和木瓜蛋白酶组成，胃蛋白酶和木瓜蛋白酶的质量比例为1:1，

偶联液采用1.5mM的N,N’-羰基二咪唑的醇溶液，

保护液采用质量分数为50％的甘油-磷酸盐缓冲液。