[发明专利]一种鲜冬虫夏草的蛋白质指纹图谱的建立方法及应用

权利要求书

1.一种冬虫夏草的蛋白质指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)制备冬虫夏草供试品溶液；

(2)使用LC-Q-TOF-MS技术测定供试品溶液得到蛋白质指纹图谱，其中，

高效液相色谱条件：所用的色谱柱为反相色谱柱，所述的反相色谱柱的填充剂为四烷基硅烷键合硅胶；流动相A为0.1％甲酸-水，流动相B为0.1％甲酸-乙腈；

梯度洗脱条件：

0min→10min：18％B→21％B；

10min→40min：21％B→30％B；

40min→50min：30％B→31.5％B；

50min→70min：31.5％B→33％B；

70min→100min：33％B→38.5％B；

100min→130min：38.5％B→49％B；

130min→135min：49％B→90％B；

135min→150min：90％B→90％B；

150min→155min：90％B→18％B。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反相色谱柱规格为4.6mm×250mm，3μm，检测波长：200-280nm；流速：0.4-0.6mL/min；柱温：25-30℃；所述反相色谱柱的填充剂为四烷基硅烷键合硅胶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，质谱条件：离子源：Dual AJS-ESI；离子化模式：正离子；扫描模式：全扫；质荷比范围：100-3000m/z；干燥气温度：300℃；干燥气流速：10L/min；雾化器压力：40psi；鞘气温度：350℃；鞘气流速：11L/min；毛细管电压：4000V；碰撞电压：200V；锥孔电压：65V；八级杆电压：750V；喷嘴电压：1000V。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中冬虫夏草供试品溶液制备方法包括如下步骤：

a、称取冬虫夏草样品，加入超纯水，匀浆，匀浆温度控制为5-10℃；

b、将匀浆至无明显颗粒的样品取出，超声提取，温度控制为15-20℃，然后将超声提取后的样品放入-20-4℃冰箱中冷冻；

c、将冷冻后的样品取出，解冻后再次匀浆，超声提取，离心，离心温度控制为4-10℃，得上清液，冻干；

d、往冻干样品中加入超纯水，复溶，之后加入无水乙醇，搅拌均匀后放置4-10℃下静置过夜；随后离心，离心温度控制为4-10℃，收集絮状沉淀，并往沉淀中加入超纯水使之复溶；最后使用水系滤膜过滤，即得供试品样品。

5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)加入样品与超纯水的重量体积比为1:7～10g/mL。

6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)冻干品与加入超纯水的的重量体积为1:10-15g/mL；所述样品复溶后与加入无水乙醇的体积比为1:4-8；往沉淀中加入超纯水的重量体积比为1:10-15g/mL；使用的水系滤膜孔径为0.22μm。

7.权利要求1-6任一项所述的冬虫夏草蛋白质指纹图谱的建立方法在虫草类中药材鉴别中的应用。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述虫草类中药材为冬虫夏草、冬虫夏草伪品和发酵虫草样品。