[发明专利]妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及人巨细胞病毒领域，且特别是涉及一种妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法。

背景技术

大量流行病学调查结果表明人巨细胞病毒(Human Cytomeglovirus，HCMV)在育龄妇女生殖道的隐性感染率超过90％。当妇女怀孕时，潜伏体内的HCMV被激活、繁殖而导致胎儿的宫内感染，结果会导致死胎(流产)、畸胎和新生儿出生缺陷。孕妇宫内感染的HCMV还可传给新生儿并潜伏在其泌尿生殖系统，病毒对这些出生就已经携带HCMV的新生儿肾脏持续的损害可能是其成年后发生原发性肾功衰竭的原因之一。

HCMV的人群隐性感染率极高，血液中代表既往感染的抗HCMV的IgG人群阳性率，国内报道为40-70％，欧美国家更高达90％。对于HCMV感染的体外诊断，目前通常采取同时检测血液中抗HCMV的IgG和IgM两种抗体,但由于血液中IgM抗体一般在感染发生四周以后才会在血液里呈现明显的升高，因此采用此种方法判断HCMV感染有近1个月的窗口期，容易出现漏诊。

近期发展起来的HCMV-DNA分子诊断技术虽然灵敏度高，但存在检测费用过高、假阳性率和与妇女生殖道感染是否同步等问题。

因此现有技术还有待于改进和发展。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，旨在解决现有技术容易出现漏诊及存在检测费用过高、假阳性率和与妇女生殖道感染不同步的问题。

本发明解决技术问题所采用的技术方案如下：

一种妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，包括以下步骤：

步骤1、采集妇女生殖道分泌物样品；

步骤2、HCMV抗原蛋白的固定：将HCMV抗原蛋白用包被液稀释后包被在固定相表面，在4℃-10℃环境下振摇过夜，弃包被液，并将包被有HCMV抗原蛋白的固定相进行封闭、洗涤，40℃-50℃真空干燥，密闭封装，4℃-10℃下保存备用；

步骤3、IgA抗体的捕获：将步骤1采集的待测样品加入到步骤2制备的包被有HCMV抗原蛋白的固定相中，待测样品中的IgA抗体与HCMV抗原蛋白充分反应后，洗涤；

步骤4、标记二抗反应：将步骤3中捕获了IgA抗体的固定相与标记二抗充分反应，洗涤；

步骤5、读取结果：根据标记二抗的变化，计算待测样品中IgA抗体的含量。

所述的妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，其中，所述步骤1中的妇女生殖道分泌物样品的采集方法具体包括以下步骤:

第一步、使用无菌棉拭子采集受试者阴道穹窿处分泌液，使得棉签头充分吸附分泌液；

第二步、采集样品后的棉签头立即浸入预装有1ML-3ML灭菌生理盐水的无菌塑料采样试管，使棉签头充分浸泡在生理盐水中，振摇3-5分钟；

第三步、弃去棉签，用胶带或不干胶纸密封塑料采样试管内的待检液，立即送检或放置在4℃-8℃的环境下待检。

所述的妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，其中，所述步骤2中的包被液为pH9-pH10的碳酸氢钠缓冲溶液。

所述的妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，其中，所述所述标记二抗为酶标记二抗、胶体金标记二抗或荧光素标记二抗。

所述的妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，其中，所述步骤2中HCMV抗原蛋白用包被液稀释后的蛋白浓度为1.0微克/毫升-3.0微克/毫升。

所述的妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体的快速检测方法，其中，所述固定相为酶标孔板或者聚乙烯微球。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明通过对妇女生殖道分泌液中微量的IgA抗体的检测，可直接反映妇女生殖道HCMV的感染情况，尤其适合育龄妇女的自查，以及使用洗消产品后的效果评价，能够有效解决现有技术容易出现漏诊及存在检测费用过高、假阳性率和与妇女生殖道感染不同步的问题，且相对于现有技术来说，准确率较高，成本较低。

附图说明

图1为本发明的免疫色谱检测试纸条示意图。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚、明确，以下结合实施例对本发明进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种妇女生殖道分泌物中抗HCMV分泌型抗体(sIgA against HCMV)的快速检测方法，包括以下步骤：