[发明专利]β受体阻滞剂个体化用药基因检测试剂盒在审
| 申请号： | 201710509884.7 | 申请日： | 2017-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN109136360A | 公开（公告）日： | 2019-01-04 |
| 发明（设计）人： | 马端;姜昕;徐沁;张静;景丹丹;唐帅男 | 申请（专利权）人： | 海门中科基因生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268 | 代理人： | 吴桂琴 |
| 地址： | 200030 上海市徐汇*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 受体阻滞剂 基因检测试剂盒 个体化用药 试剂盒 位点 高血压 生物技术领域 药物代谢酶 安全使用 测序引物 关键技术 检测结果 检测试剂 用药疗效 基因型 个位 准确率 扩增 检测 | ||
1.β受体阻滞剂个体化用药基因检测试剂盒，其特征在于，包括如下组分:
CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位点扩增和测序引物2对、PCR扩增试剂、PCR产物纯化试剂和DNA测序试剂；
所述引物序列如下：β受体阻滞剂引物序列5’-3’
位点 正向引物 反向引物
CYP2D6*10 GTAGTGAGGCAGGTATGGGG TGGTCGAAGCAGTATGGTGT
ADRB1(1165G>C) CGTCTTCTTCAACTGGCTGG CCCTACACCTTGGATTCCGA。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述引物序列扩增出的DNA序列如SEQ IDNO.1所示。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR扩增试剂选自dNTP、Taq DNA聚合酶。
4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的PCR产物纯化试剂选自SAP酶、ExoI酶。
5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的DNA测序试剂选自BigDye mix、EDTA溶液、乙醇溶液、Hi-Di溶液。
6.一种β受体阻滞剂个体化用药基因检测的方法，其特征在于，采用上述的试剂盒进行待测样本的β受体阻滞剂个体化用药基因分型检测，其包括步骤：
(1)提取样本的基因组DNA；
(2)CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位点区域PCR扩增；
(3)PCR产物纯化；
(4)DNA测序反应，进行基因分型检测。
7.按权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)CYP2D6*10和ADRB1(1165G>C)位点区域PCR扩增中，采用所述引物序列；每个反应体系为总体积50μL，包含Taq酶混合液25μL(dNTP、l0×PCR反应缓冲液、MgCl2)、去离子水17μL、引物对(5μM)3μL、基因组DNA(50ng/μL)2μL；PCR反应条件为95℃3分钟，进行35个循环的95℃30秒，56℃20秒，72℃30秒最后进行72℃5分钟。
8.按权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)PCR产物纯化中，每个反应体系总体积为5.6μL，PCR产物4μL，再加入1.6μL SAP酶混合物(SAP酶、ExoI酶、去离子水)；反应条件为37℃45分钟，85℃15分钟。
9.按权利要求6所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)DNA测序反应中，每个反应的体系为总体积10μL，PCR酶解产物1μL、BigDye mix(Bigdye、5×seq)2.2μL和测序引物0.5μL，加水补足10μL；反应条件为96℃1min，进行33个循环的96℃10sec，56℃10sec，60℃2.5min；
反应结束后每管内加入2.5μL EDTA，30μL100％乙醇，盖好，震荡4次，避光静置15分钟，3860rpm，25℃离心40min，吸弃上层液体；加入100μL 70％预冷乙醇，盖好，3860rpm，25℃离心15分钟，吸弃上层液体；酒精在室温挥发干净，加入8μL Hi-Di溶解DNA；在PCR仪上变性：95℃4分钟，冰上静置4分钟；放入测序仪中进行基因分型检测。
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