[发明专利]一种低聚龙胆糖的制备方法

权利要求书

1.一种低聚龙胆糖的制备方法，其特征在于，所述方法是以葡萄糖和纤维二糖为底物，以SEQ ID NO.1所示的β-葡萄糖苷酶为催化剂合成低聚龙胆糖，反应周期为24-48h，所述方法的反应条件为以终浓度为20g/100mL的葡萄糖和终浓度为40g/100mL的纤维二糖为底物，β-葡萄糖苷酶加酶量为400U/g纤维二糖，在pH5、温度60℃下进行酶反应，所述葡萄糖和纤维二糖的摩尔比为1:1。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述方法是毕氏酵母基因工程菌经发酵后得到的β-葡萄糖苷酶作为催化剂，所述基因工程菌是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示β-葡萄糖苷酶基因连接到表达载体pPIC9K上，导入毕赤酵母KM71中获得。

3.一种高产β-葡萄糖苷酶的毕赤酵母基因工程菌，其特征在于，所述毕赤酵母基因工程菌能够表达氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示β-葡萄糖苷酶基因，所述β-葡萄糖苷酶的基因序列来源于绿色木霉基因组，去除内含子后与表达载体相连，所述毕赤酵母基因工程菌是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示β-葡萄糖苷酶基因连接到表达载体pPIC9K上，导入毕赤酵母KM71中获得。

4.一种应用权利要求3所述毕赤酵母基因工程菌生产β-葡萄糖苷酶的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)分批发酵阶段：将种子液以8％-10％接种量接种于发酵罐中，控制温度28-32℃、初始转速180-200rpm、初始通气量7L/min、溶氧28-32％、pH 4.5-5.5；(2)补料发酵阶段：待溶氧上升至80-100％，以恒速流加甘油的方式进行补料培养，控制温度28-30℃、溶氧28-32％、pH 4.5-5.5；(3)诱导培养阶段：当菌体细胞浓度达到OD₆₀₀为80-120时，用甲醇流加仪流加甲醇诱导产酶，甲醇浓度控制在0.5-1％，控制温度28-32℃、溶氧28-32％、pH 4.5-5.5，诱导96-144h。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，诱导培养阶段是当菌体细胞浓度达到OD600为100时，开始流加甲醇诱导产酶；诱导培养阶段控制温度为28℃。

6.权利要求1所述方法在食品方面的应用。