[发明专利]单克隆抗体配对检测方法及其应用、检测装置

说明书

【技术领域】

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种单克隆抗体配对检测方法及其应用、检测装置。

【背景技术】

1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤，成功的建立了单克隆抗体制备技术。融合后的杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既具有骨髓瘤细胞在体外培养中无限快速增殖且永生不死的能力，又具有淋巴细胞合成和分泌特异性抗体的能力。

相关技术中，针对同一蛋白抗原但不同表位的两个单克隆抗体的配对方法，常规采用ELISE检测方法。ELISE检测方法具有复杂的酶标过程、包板过程、加样过程，且反应时间较长，需要专业人员和设备才能进行。

因此，有必要提供一种新的技术解决上述技术问题。

【发明内容】

本发明的目的是克服上述技术问题，提供一种单克隆抗体配对检测方法，不仅能快速测定不同的单克隆抗体是否结合同一个位点，同时还简化了检测步骤、缩短了检测时间。

本发明的技术方案是：

一种单克隆抗体配对检测方法，包括如下步骤：

步骤S1：将具有多个抗原决定簇的完全抗原免疫Balb/c小鼠，获得多株稳定细胞株，从而制备得到不同的阳性单克隆抗体；

步骤S2：将每株单克隆抗体和羊抗鼠IgG分别包被在NC膜上，作为检测线和质控线，NC膜两端分别贴样品垫和吸水纸，制作形成胶体金条；

步骤S3：将每株单克隆抗体分别进行胶体金标记；

步骤S4：以两两交叉的方式将胶体金标记的抗体直接滴加在包被单克隆抗体的胶体金条的样品垫上，再将待检测样品滴加在样品垫上，同时做空白对照，反应后选取质控线出线，阳性样品检测线出线，而空白对照检测线不出线的单克隆抗体对作为配对单抗。

优选的，步骤S4中，反应10min后进行检测结果判断。

优选的，所述胶体金条宽度为4mm。

优选的，步骤S1具体包括如下步骤：

将具有多个抗原决定簇的完全抗原免疫Balb/c小鼠，并将免疫Balb/c小鼠能分泌特异性抗体的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合，筛选出阳性杂交瘤细胞株；

对所述阳性杂交瘤细胞株进行有限稀释克隆化培养、定株扩大培养；

将定株扩大培养后的阳性杂交瘤细胞株分别注射进已经致敏的Balb/c小鼠腹腔，并采集腹水进行纯化，得到由不同阳性单克隆抗体杂交瘤细胞株分泌的特异性抗体。

本发明还提供一种单克隆抗体配对检测方法在检测人类粪便中幽门螺杆菌的应用。

本发明还提供一种单克隆抗体配对检测装置。所述单克隆抗体配对检测装置包括PVC底板、形成于所述PVC底板的NC膜、形成于所述NC膜上且间隔设置的检测线和质控线、固定于所述PVC板且分别贴设于所述NC膜两端的样品垫和吸水纸，所述检测线由单克隆抗体包被于所述NC膜上形成，所述质控线由羊抗鼠IgG包被于所述NC膜上形成。

与相关技术相比，本发明提供的单克隆抗体配对检测方法，有益效果在于：

一、本发明采用双抗体夹心胶体金免疫层析检测方法筛选针对同一蛋白抗原但不同表位的两个单克隆抗体，与常规ELISE检测方法相比，省去了复杂的酶标过程、包板过程、加样过程，滴加样本后10分钟即可用肉眼观察判断结果，检测时间快速，且无需专业人员和专业设备即可完成检测操作。

二、所述单克隆抗体配对检测方法，对胶体金免疫层析技术进行进一步改进，省去了制备金标垫的过程，以及繁琐的交叉黏贴金标垫的步骤，将标记好抗体的胶体金也直接滴加在待筛选的包被抗体的胶体金条的样品垫上即可，操作简便。

三、本发明提供的单克隆抗体配对检测方法，适用于具有多个抗原决定簇的抗原检测；所述单克隆抗体配对检测方法，可用于制备胶体金双抗体夹心检测法所需的配对单克隆抗体；用于制备针对HP抗原不同位点的抗HP的抗体；特别地可用于快速检测人类粪便中幽门螺杆菌。

【附图说明】

图1为本发明提供的单克隆抗体配对检测装置的结构示意图；

图2为本发明提供的单克隆抗体配对检测方法检测结果显示图。

【具体实施方式】

下面将结合附图和实施方式具体实施方式对本发明作进一步说明。

实施例一