[发明专利]一种稀有人参皂苷Rk2和Rh3的分离方法

说明书

本发明涉及一种运用高速逆流色谱法分离人参皂苷Rk₂和人参皂苷Rh₃单体的方法。溶剂条件为：正己烷‑乙酸乙酯‑甲醇‑水作为两相溶剂系统，上相作为固定相，下相作为流动相，连接方式采用正接反转，紫外检测器检测。此方法分离得到的稀有人参皂苷Rk₂和人参皂苷Rh₃纯度均大于90％，具有样品纯度高、样品损耗少、分离效率高等优点。

技术领域

本发明属于天然药物分离领域，涉及一种分离纯化人参皂苷Rk₂、Rh₃方法，尤其涉及一种利用高速逆流色谱分离纯化高纯度人参皂苷Rk₂、 Rh₃的方法。

背景技术

人参皂苷Rk₂具有良好的抑制肿瘤细胞生长、诱导分化癌细胞、具有抗浸润和抗转移、增加免疫力、化学抗癌药物的增效减毒、抗致癌物质的性能,可用于放疗、化疗的增效减毒。人参皂苷Rh₃具有抗癌作用。

人参皂苷Rk₂和Rh₃的结构式如下

人参皂苷Rk₂和Rh₃一般通过水解二醇组常见人参皂苷如人参皂苷Rb₁、Rb₂、Rb₃、Rc、Rd等获得。但人参皂苷Rk₂和Rh₃是同分异构体，很难通过常用的色谱法等分离Rk₂、Rh₃单体，采用制备型高效液相色谱法可以分离Rk₂、Rh₃，但效率低、费时，且固定相对样品有不可逆吸附作用，样品损失大。高速逆流色谱(HSCCC)是近些年发展起来的一种连续的无需固定相支撑物的高效、快速的液-液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、节约溶剂等特点，已经广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

发明内容

本发明的目的是提供利用高速逆流色谱制备Rk₂、Rh₃单体的方法，以克服现有技术中存在的不足。

本发明通过以下技术方案实现：

一种利用高速逆流色谱分离制备Rk₂、Rh₃单体的方法，由分离和检测两部分组成。

本发明所用的Rk₂、Rh₃混合物通过如下方法获得。取西洋参茎叶皂苷于碱性条件下进行降解，降解条件为：将氢氧化钠放入甘油中升温至130℃，其中氢氧化钠与甘油质量体积比为1：10；再加入与氢氧化钠等重量的西洋参茎叶皂苷加热升温至245℃，反应3小时；降解产物经硅胶柱层析分离(流动相为乙酸乙酯：石油醚：乙醇＝100： 100：2.3)，合并含有人参皂苷Rk₂、Rh₃组分，回收溶剂，得到Rk₂、 Rh₃混合物(Rk₂、Rh₃含量之和约为70％)。