[发明专利]浙江道地性白术的鉴定方法在审
| 申请号： | 201710435641.3 | 申请日： | 2017-06-11 |
| 公开（公告）号： | CN107164494A | 公开（公告）日： | 2017-09-15 |
| 发明（设计）人： | 陈绍宁;胡秀芳;梁宗锁;吕洪飞;杨东风;贾巧君;丁先锋;陈羽迪 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州中成专利事务所有限公司33212 | 代理人： | 金祺 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 浙江 道地 白术 鉴定 方法 | ||
【权利要求书】：
1.浙江道地性白术的鉴定方法，包括DNA提取，其特征是还包括以下步骤：
1)、PCR扩增：
PCR扩增体系：
引物F(10μM) 0.2μl
引物R(10μM) 0.2μl
Green-2-Go Master mix(2×) 5μl
DNA 3～15ng
RNase free H2O 定容至 10μl；
引物F：ATGCGATACTTGGTGTGAAT，
引物R：GACGCTTCTCCAGACTACAAT；
PCR扩增程序为：
95℃变性5min；
95℃变性15s，Tm退火25s，72℃延伸30s；40个循环；引物退火温度为55-59℃；
2)、将扩增产物直接进行HRM：
HRM程序为：95℃，1min；40℃，1min；65℃，1s；95℃，1min；降温至25℃；
收集65-95℃的荧光信号数据，获得高分辨率熔解曲线；当熔解曲线满足Tm值92℃出现单峰曲线形状时，判定是浙白术。
2.根据权利要求1所述的浙江道地性白术的鉴定方法，其特征是：
所述步骤1)中退火温度为57℃。
3.根据权利要求1或2所述的浙江道地性白术的鉴定方法，其特征是：
所述步骤2)中在Roche LightCyclerTM 480Ⅱ荧光定量PCR仪器上进行HRM。
4.根据权利要求3所述的浙江道地性白术的鉴定方法，其特征是：
所用软件为LightCycler 480Ⅱ分析软件。
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