[发明专利]一种识别HPV18和/或HPV45的单克隆抗体及其应用

说明书

本发明提供一种识别HPV18和/或HPV45的单克隆抗体及其应用，该抗体能够高特异性地检测宫颈上皮癌(前)变细胞中的HPV18和/或HPV45 E7致癌蛋白，从而能够明显区分由HPV18和/或HPV45持续感染所引起的宫颈上皮癌(前)变异常，为医生准确诊断相关病例提供有效的辅助检测信息，改善宫颈癌检测和早期干预，降低相关宫颈癌变的漏诊和临床过度诊疗，减少和避免不必要的阴道镜检查。

技术领域

本发明属于生物诊断及医药领域，具体地说，本发明涉及识别由人乳头状瘤病毒(HPV)18和/或45持续感染引起的癌(前)变肿瘤细胞，包括人宫颈上皮癌(前)变细胞的单克隆抗体及其免疫组化染色应用。

背景技术

宫颈癌(前)病变的最终诊断是以病理组织细胞形态学作为金标准。宫颈病变级别，分为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)(CIN1,CIN2和CIN3)、原位癌和浸润癌。其中低度上皮内瘤变CIN1是HPV急性感染的表现，病变消退转为正常组织的概率很高。高度上皮内瘤变CIN3具有进展为癌的显著风险，因此临床治疗方案明确。目前临床上对CIN2的处理存在争议，因为精确诊断有困难，适合的治疗方案也不确定。观察者对CIN2诊断有较大程度的差异，即使是在受训严格的美国，对CIN2的判读也存在明显不一致。CIN2不仅仅是一种独立的中间病变，似乎更是低级别和高级别病变的混合，而通过组织学很难对此进行简单的区分。因此如何区分低级别和高级别病变，精确诊断宫颈恶性病变，为临床干预和治疗提供更精准的信息，成为临床宫颈诊疗中亟待解决的问题。

在人类所有肿瘤中，宫颈癌是目前病因唯一明确的肿瘤，同时也是唯一可以预防的肿瘤。它是人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)持续感染的结果。癌症发生过程中HPV DNA整合入人体细胞基因组内，转化型细胞内开始持续表达HPV E6和E7蛋白。这两个致癌蛋白是导致宫颈癌的重要原因，这些小分子蛋白分别含158个和98个氨基酸,具有锌指结构(色氨酸-X-X-色氨酸)，此结构与细胞的恶性转化密切相关。HPV E6蛋白通过E6-AP(E6associated protein)的介导，结合并降解抑癌蛋白p53。HPV E7蛋白与抑癌蛋白pRb结合，使pRb释放核转录因子E2F，致使细胞过度增殖，细胞周期调控失控，导致细胞的永生化并促进宫颈癌的发生，这使得E7可作为高度宫颈损伤和宫颈癌检测的一个肿瘤标志物。

HPV是一种小DNA病毒，具有很强的嗜鳞状上皮的特性，主要侵犯鳞状上皮的基底层细胞和位于宫颈转化区的化生细胞。目前已知的有一百多个型别，根据致癌性，分为高危型HPV和低危型HPV两类。与人类肿瘤相关的高危型HPV有四十几种，其中常见的主要包括HPV18、HPV45等型别。在宫颈鳞癌中HPV18的感染率位居第二,但在宫颈腺癌中HPV18却为主要的感染型别(47.4％)。因此HPV18是子宫颈癌中最主要分布的高危HPV型别之一。

本领域技术人员致力于开发一种不依赖于病理组织细胞形态学的检测方法和技术，以检测由HPV18和/或HPV45引起的宫颈癌，特别是高度宫颈上皮内瘤变。同时一方面区分非恶性病变的细胞发育异常，另一方面也可提示具有高度恶变风险的早期宫颈病变，为临床诊疗提供更为客观、精准的诊断方案。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由识别HPV18和/或HPV45的单克隆抗体及其应用。

在本发明的第一方面，提供了一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：

SEQ ID NO.:4所示的CDR1，

SEQ ID NO.:6所示的CDR2，和

SEQ ID NO.:8所示的CDR3。

在另一优选例中，所述重链可变区具有SEQ ID NO.:10所示的氨基酸序列。